[发明专利]用于造血细胞的基因修饰的方法在审
| 申请号： | 201980049019.6 | 申请日： | 2019-07-30 |
| 公开（公告）号： | CN112888777A | 公开（公告）日： | 2021-06-01 |
| 发明（设计）人： | B·比尔德;G·D·沙;J·A·布伦罗恩塞洛;J·C·塞格瓦桑兹;P·瑞欧加尔道;S·纳瓦罗奥尔多纳兹;E·阿尔玛尔扎诺瓦;O·奎恩塔纳布斯塔曼特;C·迈萨努纳兹;K·劳;K·帕特尔 | 申请（专利权）人： | 能源环境和技术研究中心O.A.;M.P.;生物医学网络研究财团中心M.P.;希门尼斯·迪亚兹健康研究基金会研究所;火箭制药有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/074 | 分类号： | C12N5/074;C12N5/078 |
| 代理公司： | 中国贸促会专利商标事务所有限公司 11038 | 代理人： | 傅宇昌 |
| 地址： | 西班牙*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 造血 细胞 基因 修饰 方法 | ||
1.一种造血细胞的基因修饰的方法，所述方法包括：
(a)提供造血细胞；
(b)使所述造血细胞与泊洛沙姆接触；
(c)使所述造血细胞与前列腺素E2(PGE2)或其衍生物接触；以及
(d)使所述造血细胞与重组逆转录病毒载体接触。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述重组逆转录病毒载体是重组慢病毒载体。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述造血细胞已经被操纵。
4.根据权利要求3所述的方法，其中所述造血细胞是CD34富集细胞。
5.根据权利要求1所述的方法，其中所述泊洛沙姆选自由下列各项组成的组：泊洛沙姆288、泊洛沙姆335、泊洛沙姆338和泊洛沙姆407。
6.根据权利要求5所述的方法，其中所述泊洛沙姆是泊洛沙姆338(LentiBOOSTTM)。
7.根据权利要求1所述的方法，其中所述PGE2或其衍生物是经修饰的。
8.根据权利要求7所述的方法，其中所述PGE2或其衍生物是16,16-二甲基PGE2(dmPGE2)。
9.根据权利要求1所述的方法，其中所述PGE2或其衍生物是未经修饰的。
10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其进一步包括使所述造血细胞与硫酸鱼精蛋白和/或重组纤连蛋白片段，任选地RetroNectinTM接触。
11.根据权利要求1或10所述的方法，其中所述接触步骤是在相同或重叠的时间段期间执行的。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中所述PGE2或其衍生物的浓度为5-30μg/mL。
13.根据权利要求12所述的方法，其中所述PGE2或其衍生物的浓度为约10μg/mL。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中所述泊洛沙姆的浓度为200-1200μg/mL。
15.根据权利要求14所述的方法，其中所述泊洛沙姆的浓度为约1000μg/mL。
16.根据权利要求10至15中任一项所述的方法，其中所述硫酸鱼精蛋白的浓度为4-10μg/mL。
17.根据权利要求16所述的方法，其中所述硫酸鱼精蛋白的浓度为约4μg/mL。
18.一种增强造血细胞的重组逆转录病毒载体介导的基因修饰的方法，所述方法包括：
(a)使造血细胞与有效量的PGE2或其衍生物，任选地人PGE2或16,16-二甲基PGE2(dmPGE2)和有效量的泊洛沙姆，任选地泊洛沙姆338(LentiBOOSTTM)离体接触；以及
(b)使所述造血细胞与重组逆转录病毒载体接触，所述重组逆转录病毒载体包含含有所关注的基因或编码所关注的多肽的多核苷酸，
其中与在不存在所述PGE2或其衍生物和所述泊洛沙姆的情况下用所述重组逆转录病毒载体转导造血细胞相比，所述重组逆转录病毒载体的病毒转导功效得到增强。
19.根据权利要求18所述的方法，其进一步包括使所述造血细胞与有效量的硫酸鱼精蛋白和/或重组纤连蛋白多肽或其变体离体接触。
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