[发明专利]具有消炎性质的新型蛋白质

说明书

本发明提供了一种由根据SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的氨基酸序列组成的分离或重组蛋白和其用于预防或治疗炎性病状的用途。

技术领域

本发明涉及一种新型蛋白质、其在医学中的用途(特别是其在预防或治疗炎性病状中的用途)以及用于制备所述蛋白质的方法。

背景技术

已经报道了被不同地称为免疫球蛋白结合蛋白(BiP)或葡萄糖调节蛋白78(Grp78)的人类分子伴侣蛋白的消炎性质(Corrigall VM、Bodman-Smith MD、Brunst M、Cornell H、Panayi GS，应激蛋白BiP刺激人外周血单核细胞表达消炎细胞因子谱并抑制抗原呈递细胞功能：与炎性关节炎治疗的相关性(The stress protein,BiP,stimulateshuman peripheral blood mononuclear cells to express an anti-inflammatorycytokine profile and to inhibit antigen presenting cell function:relevance tothe treatment of inflammatory arthritis)，《关节炎与风湿病(Arthritis Rheum)》，2004；50:1167–1171)。细菌表达的重组人蛋白的氨基酸序列不同于天然存在的蛋白质的已知序列(SEQ ID NO:5)。

BiP是驻留在内质网(ER)中的一种普遍存在的内源性表达的蛋白质，并且作为细胞内蛋白，是新生多肽正确折叠以及ER应激时保护细胞免受累积的误折叠蛋白影响所必需的。因此，BiP也被定义为应激蛋白和热休克蛋白70家族成员。在细胞应激期间上调的BiP在细胞表面被表达并分泌到细胞外基质中，使得游离BiP可以被分泌到患有类风湿性关节炎的患者的滑膜液中(Corrigall VM等人，同上)。

已经克隆了编码这种原生(天然存在的)BiP的基因p78，并且已经表达了重组人蛋白(WO2000/21995)。

WO2000/21995公开了BiP的新型蛋白质类似物(SEQ.1和SEQ.2)及其在治疗炎性疾病中的效用。

WO2006/111720公开了相同的两种类似物在治疗和预防骨质流失和吸收中的用途。

WO2002/072133公开了BiP(特别是来自WO2000/21995的SEQ.1和SEQ.2)在治疗或预防不期望的免疫应答中的用途，包含治疗免疫介导的疾病，例如自身免疫性疾病、I型糖尿病、甲状腺炎、多发性硬化症、狼疮、克罗恩氏病、肝炎或与移植器官排斥相关联的不期望的免疫应答。

尽管BiP类似物(SEQ.1和SEQ.2)在多种体内和体外炎症动物模型中表现出结果，但是根据这些模型进行推断以预测在临床中可能发生什么是有问题的，并且仍然存在制造用于向患者施用的具有适当纯度和功效的蛋白质的挑战。

BiP类似物SEQ.1和SEQ.2(从现在开始称为SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2)是使用细菌细胞生产的，但由于多种原因不适合作为人类施用的临床产品。据报道，SEQ ID NO:1上的6x组氨酸标签(用于通过亲和色谱进行蛋白质分离)可以改变蛋白质的物理和功能性质。(Santiago FW等人，《来自H1N1的重组血凝素蛋白在在各种蛋白质表达系统中被生产时的抗原和免疫原性性质(Antigenic and immunogenic properties of recombinanthemagglutinin proteins from H1N1 when produced in various protein expressionsystems)》，《疫苗(Vaccine)》，第30卷，第31期，2012年6月29日，第4606-4616页)而用于螯合的金属离子可能在未完全去除的情况下渗入血流。因此，SEQ ID NO:1不能在临床上使用。