[发明专利]用于检测和定量肝功能代谢产物的质谱测定方法

说明书

本发明描述了一种通过质谱测定样品中一种或多种分析物的量的方法，所述一种或多种分析物选自12,13‑DiHOME、3‑羟基丁酸盐(BHBA)、3‑羟基辛酸盐、3‑甲基戊二酰肉碱、3‑脲基丙酸盐、7‑α‑羟基‑4‑胆甾烯‑3‑酮(7‑Hoca)、柠檬酸盐、岩藻糖、富马酸盐、γ‑生育酚、谷氨酸盐、戊二酸盐、甘油、甘氨鹅去氧胆酸盐、甘胆酸盐、次黄嘌呤、马来酸盐、丙二酸盐、甘露糖、乳清酸盐、2,3‑吡啶二羧酸盐、核糖、丝氨酸、牛磺酸、牛磺鹅去氧胆酸盐、牛磺胆酸盐、棕榈油酸盐、亚麻酸盐、黄嘌呤、木糖醇及其组合。该方法包括在适于从一种或多种分析物的每一种产生可通过质谱检测的一种或多种离子的条件下，使样品经受电离源；通过质谱测量来自一种或多种分析物的每一种的一种或多种离子的量；和使用一种或多种离子的测量的量来测定样品中一种或多种分析物的量。本发明还描述了一种试剂盒，该试剂盒包含一种或多种分析物的每一种的一种或多种同位素标记的类似物作为内部标准品。

背景

本发明提供以下描述本发明背景的信息以帮助理解本发明，这些信息不能被认为构成或描述了本发明的现有技术。

肝功能可能受到各种生活方式、疾病和病症(包括例如饮食、酒精滥用、脂肪肝疾病、感染、药物和癌症)的影响。通常，在人经历肝功能障碍的症状之前，可能会损坏大量的肝组织。当前，评估肝功能的最常见测试包括血液中特定酶和蛋白质的测量。这些测试包括丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰转移酶(GGT)和血清胆碱酯酶(ChE)总胆固醇、总甘油三酯、白蛋白、白蛋白/球蛋白比、总蛋白、直接胆红素和总胆红素。

当前的肝脏血液测试可以提供肝脏疾病包括非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、纤维化和肝硬化的第一指征，但是该测试不能检测肝功能的早期变化并且不能区分疾病。当进一步评估未显示明显的肝脏疾病原因(例如药物、病毒性肝炎或过量饮酒)，并且当肝脏的X射线或影像学研究显示存在脂肪时，则怀疑是NASH，但证明NASH诊断并将其与单纯性脂肪肝分开的唯一手段是肝脏活检。确定肝纤维化的存在和分期也需要肝脏活检。当前，血液测试或扫描不能可靠地提供此信息。肝脏活检是一种侵入性手术，其需要将针头插入穿过皮肤和切除一小块肝脏。该手术是痛苦的，并且与过多出血的风险相关。因此，需要一种不太侵入性的方法(即不需要进行肝脏活检的方法)来评估肝功能，以作为当前可用临床测定的补充。

NAFLD的流行(其涵盖从简单的、良性的肝脂肪变性到以脂质蓄积、炎症、肝细胞膨胀和不同程度的纤维化为特征的NASH的整个组织学谱)与肥胖病流行相伴而持续增加。尽管越来越认识到与肥胖相关的肝病，但对NAFLD和NASH的发病机理知之甚少，并且尚无FDA批准的以NASH作为适应症的疗法。由于需要进行侵入性肝脏活检，NASH的诊断仍然很复杂并且具有很大的风险。因此，可用于评估肝功能(包括诊断和分期NAFLD的能力)的基于血液代谢产物生物标志物概况的鉴定是一项重大且尚未得到满足的医疗需求。