[发明专利]用于扩增脂肪来源的干细胞的方法

权利要求书

1.一种用于使间充质干细胞(MSC)增殖的方法，所述方法包括：

(a)从身体组织或器官中分离细胞；以及

(b)将(a)中获得的经分离的细胞在生长培养基中孵育，所述生长培养基包含：

(i)至少一种TNF超家族配体，和

(ii)至少一种凋亡抑制剂，

从而获得MSC富集的细胞群体。

2.一种用于使脂肪来源的干细胞(ASC)增殖的方法，所述方法包括：

(a)从抽脂术抽吸物中分离基质血管组分(SVF)细胞；以及

(b)将(a)中获得的经分离的细胞在生长培养基中孵育，所述生长培养基包含：

(i)至少一种TNF超家族配体，和

(ii)至少一种凋亡抑制剂，

从而获得ASC富集的细胞群体。

3.如权利要求2所述的方法，其中在步骤(b)之前，将所述SVF细胞保持培养至少两次传代。

4.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述TNF超家族配体选自由以下组成的组：Fas配体(FasL)、肿瘤坏死因子(TNF)α、TNF相关凋亡诱导配体(TRAIL)、肿瘤坏死因子样弱凋亡诱导剂(TWEAK)，以及它们的组合。

5.如权利要求4所述的方法，其中所述TNF超家族配体是FasL。

6.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述生长培养基还包含选自由以下组成的组的附加活性剂：生长因子、激素、细胞因子，以及它们的任何组合。

7.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述孵育持续至少1小时。

8.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述孵育持续约1小时、2小时、3小时或更多小时，或持续约1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、17天、20天或23天。

9.如权利要求8所述的方法，其中所述孵育持续2小时。

10.如权利要求8所述的方法，其中所述孵育持续4天。

11.如权利要求8所述的方法，其中所述孵育持续14天。

12.如权利要求11所述的方法，其中所述培养基每3天或每4天更新一次。

13.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述凋亡抑制剂是在所述至少一种TNF超家族配体之前、与其一起或在其之后施用的。

14.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述凋亡抑制剂选自由以下组成的组：半胱天冬酶抑制剂、丝氨酸蛋白酶(例如HTRA2)抑制剂、凋亡蛋白抑制剂(IAP)(例如XAF1)、NF-κB抑制剂、Smac抑制剂，以及它们的组合。

15.如权利要求14所述的方法，其中所述半胱天冬酶抑制剂是Z-VAD-fmk。

16.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述凋亡抑制剂的量在约1μM至约50μM的范围内，或在约5μM至约25μM的范围内。

17.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述至少一种TNF超家族配体的浓度在约0.1ng/ml至约100ng/ml的范围内。

18.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中在与所述至少一种TNF超家族配体和所述凋亡抑制剂一起孵育后，去除所述至少一种TNF超家族配体和所述凋亡抑制剂，并让所述细胞分化。