[发明专利]血红蛋白分析方法

说明书

本发明提供一种分离和检测含有异常血红蛋白和地中海贫血标记物的各种血红蛋白的方法。本发明涉及一种血红蛋白分析方法，该方法包括通过阳离子交换色谱来分离试样中的血红蛋白，在该血红蛋白的分离中，使用pH为8.1以上、渗透压为40mOsm/kg以下的洗脱液。

技术领域

本发明涉及血红蛋白的分析方法。

背景技术

血红蛋白(Hb)是由与氧结合的血红素(色素部分)和携带血红素的球蛋白构成的色素蛋白，与氧向全身细胞的运输有关。正常人球蛋白的多肽有α、β、γ、δ链这样的4种亚基，它们构成由2根α链和2根非α链构成的四聚体。正常人Hb存在HbA(α2β2)、HbA2(α2δ2)和HbF(α2γ2)这3种，但其大部分为HbA。HbA主要包含HbA0和糖化的HbA1c，HbA1c作为糖尿病等的标记物使用。

球蛋白亚基的立体结构的异常引起异常Hb症，另一方面，球蛋白亚基的形成不全引起地中海贫血，均导致贫血，进而在重症例时，引起溶血、发育不全、骨骼变形等。异常Hb症一般通过检测HbS、HbC、HbE、HbD等异常Hb来诊断。地中海贫血大致分为因α链的形成不全所致的α地中海贫血和因β链的形成不全所致的β地中海贫血，一般以HbA2、HbF等的高值为指标来诊断。

有使用高效液相色谱(HPLC)来检测血红蛋白异常的方法。在专利文献1中记载了通过使用将以不同比率含有磷酸一氢二碱金属盐(成分1)和磷酸二氢一碱金属盐(成分2)的多种洗脱液依次送液的梯度洗脱的HPLC，能够分离作为异常Hb的HbS、HbC、HbE和HbD或地中海贫血标记物HbA2和HbF。在专利文献2中记载了通过使用含有离子对试剂且pH在7.1～7.3的范围的洗脱液的离子交换液相色谱来分离HbA0、HbS和HbC。在专利文献3中记载了通过阳离子交换高效液相色谱并使用pH6.88～7.50的洗脱液来分析血红蛋白S，或者使用pH6.60～6.80的洗脱液来分析血红蛋白A2的方法。

现有技术献

专利文献

专利文献1：日本特开2016－27326号公报

专利文献2：日本特开2010－237110号公报

专利文献3：国际公开公报第2011/096420号

发明内容

本发明涉及从血液试样中分离和检测含有异常血红蛋白和地中海贫血标记物的各种血红蛋白的方法。

因此，本发明提供以下方案。

〔1〕一种血红蛋白分析方法，包括通过阳离子交换色谱来分离试样中的血红蛋白，

在该血红蛋白的分离中，使用pH为8.1以上、渗透压为40mOsm/kg以下的洗脱液。

〔2〕根据〔1〕所述的方法，其中，所述洗脱液含有不含金属离子的缓冲剂。

〔3〕根据〔2〕所述的方法，其中，所述缓冲剂为Bicine、Tricine或TES。

〔4〕根据〔2〕或〔3〕所述的方法，其中，所述洗脱液中的所述缓冲剂的浓度为2～17mmol/L。

〔5〕根据〔1〕～〔4〕中任一项所述的方法，其中，所述洗脱液含有血红蛋白变性剂。

〔6〕根据〔1〕～〔5〕中任一项所述的方法，其中，通过使用所述洗脱液的梯度洗脱来分离血红蛋白。

〔7〕根据〔6〕所述的方法，其中，在所述梯度中所述洗脱液的比例从0％增加至100％。

〔8〕根据〔1〕～〔7〕中任一项所述的方法，其中，将选自HbS、HbC、HbE、HbD和HbO－Arab中的至少1种异常血红蛋白分离。