[发明专利]用于质谱分析的多肽的依序消化

权利要求书

1.一种制备用于分析的多肽的方法，该方法包括：

a.在第一次消化中裂解该多肽，其中该裂解产生该多肽的至少两个片段；

b.将该至少两个片段彼此分离以产生第一含大肽片段的溶液和第一含小肽片段的溶液；

c.在第二次消化中裂解该第一含大肽片段的溶液的这些大肽片段，其中该第一含大肽片段的溶液的这些大肽片段中的至少一个被裂解以产生该第一含大肽片段的溶液的这些大肽片段的至少两个片段；

d.分析c.的该消化溶液和b.的该含小肽片段的溶液。

2.如权利要求1所述的方法，其中在分析之前将c.的该消化溶液和b.的该含小肽片段的溶液合并。

3.一种制备用于分析的多肽的方法，该方法包括：

a.在第一次消化中裂解该多肽，其中该裂解产生该多肽的至少两个片段；

b.将该至少两个片段彼此分离以产生第一含大肽片段的溶液和第一含小肽片段的溶液；

c.在第二次消化中裂解该第一含大肽片段的溶液的这些大肽片段，其中该第一含大肽片段的溶液的这些大肽片段中的至少一个被裂解以产生该第一含大肽片段的溶液的这些大肽片段的至少两个片段；

d.将这些大肽片段的该至少两个片段彼此分离以产生第二含大肽片段的溶液和第二含小肽片段的溶液；

e.在第三次消化中裂解该第二含大肽片段的溶液的这些大肽片段，其中该第二含大肽片段的溶液的这些大肽片段中的至少一个被裂解以产生该第二含大肽片段的溶液的这些大肽片段的至少两个片段；

f.分析c.的该消化溶液、b.的该第一含小肽片段的溶液和d.的该第二含小肽片段的溶液。

4.如权利要求2所述的方法，其中在分析之前将c.的该消化溶液、b.的该第一含小肽片段的溶液和d.的该第二含小肽片段的溶液合并。

5.如权利要求1或3所述的方法，其中在该第一次消化中裂解该多肽包括蛋白水解裂解或化学裂解。

6.如权利要求5所述的方法，其中该裂解是通过蛋白酶完成的蛋白水解裂解。

7.如权利要求6所述的方法，其中该蛋白酶选自由以下组成的组：中性粒细胞弹性蛋白酶、胰蛋白酶、蛋白内切酶Glu-C、蛋白内切酶Arg-C、胃蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、胰凝乳蛋白酶B、Lys-N蛋白酶、Lys-C蛋白酶、Glu-C蛋白酶、Asp-N蛋白酶、胰肽酶、羧肽酶A、羧肽酶B、蛋白酶K和嗜热菌蛋白酶及它们的组合。

8.如权利要求7所述的方法，其中该蛋白酶是胰蛋白酶。

9.如权利要求5所述的方法，其中该裂解是通过化学药品完成的化学裂解。

10.如权利要求9所述的方法，其中该化学药品选自由以下组成的组：溴化氰、2-硝基-5-硫代氰基苯甲酸酯、羟胺和BNPS-粪臭素，及它们的组合。

11.如权利要求1或3所述的方法，其中在该第一次消化中将该样品中的该多肽裂解之前使该多肽变性。

12.如权利要求1或3所述的方法，其中在该第一次消化中将该样品中的该多肽裂解之前使该多肽烷基化。

13.如权利要求1或3所述的方法，其中在该第一次消化中将该样品中的该多肽裂解之前使该多肽变性并且烷基化或还原。

14.如权利要求1或3所述的方法，其中在该第一次消化中将该样品中的该多肽裂解之前使该多肽变性、还原和烷基化。

15.如权利要求1或3所述的方法，其中在该第二次消化中裂解该多肽包括通过蛋白酶完成的蛋白水解裂解。