[发明专利]人参皂苷-短双歧杆菌M-16V微胶囊及其制备方法

权利要求书

1.一种人参皂苷-短双歧杆菌M-16V微胶囊的制备方法，其特征在于，包括：溶液配制、短双歧杆菌M-16V菌种的活化、菌悬液的制备、微胶囊的制备；

所述溶液配制步骤包括模拟胃液的配制、模拟肠液的配制、解囊液的配制；

所述微胶囊的制备包括：将菌悬液与高温灭菌后的人参皂苷和槐实胶溶液混合均匀后，将菌悬液挤压入磁力搅拌的无菌CaCl₂溶液中，常温下固化，通过重力沉降从CaCl₂溶液中回收微胶囊，然后用滤纸过滤，水冲洗除去多余氯化钙和盐类，得到湿微胶囊，然后对湿微胶囊进行干燥，得到人参皂苷-短双歧杆菌M-16V微胶囊。

2.根据权利要求1所述的人参皂苷-短双歧杆菌M-16V微胶囊的制备方法，其特征在于，所述模拟胃液的配制方法包括：配制1-5g/L NaCl溶液，调pH至2-3，110-130℃高压灭菌10-20min；取2-4g胃蛋白酶，加入到灭菌的NaCl溶液中溶解，然后用0.1-0.3μm滤膜过滤除菌。

3.根据权利要求1所述的人参皂苷-短双歧杆菌M-16V微胶囊的制备方法，其特征在于，所述模拟肠液的配制方法包括：称取KH₂PO₄ 4-8g加入300-800ml蒸馏水溶解，然后调pH为4-8，110-130℃灭菌10-20min；另称取胰蛋白酶5-15g，溶于200-500ml无菌水，然后与灭菌的KH₂PO₄溶液混合均匀，定容至500-1500ml，最后用0.1-0.3μm滤膜过滤除菌。

4.根据权利要求1所述的人参皂苷-短双歧杆菌M-16V微胶囊的制备方法，其特征在于，所述解囊液的配制方法包括：分别称取10-18g的KH₂PO₄和7-15g的C₆H₈O₇，加蒸馏水溶解定容至500-1500ml，然后调节pH为6-8，110-130℃灭菌10-20min。

5.根据权利要求1所述的人参皂苷-短双歧杆菌M-16V微胶囊的制备方法，其特征在于，所述短双歧杆菌M-16V菌种的活化步骤包括：将冻存于-20℃至-10℃的菌株接种至MRS肉汤培养基中，35-42℃静置厌氧培养20-30h，连续活化三代后用于后续实验。

6.根据权利要求1所述的人参皂苷-短双歧杆菌M-16V微胶囊的制备方法，其特征在于，所述菌悬液的制备步骤包括：取1-3％活化好的菌液于MRS肉汤培养基中30-40℃培养10-15h后，离心，弃去上清，用PBS缓冲液调整菌液浓度为10⁸-10⁹CFU/ml。

7.根据权利要求6所述的人参皂苷-短双歧杆菌M-16V微胶囊的制备方法，其特征在于，所述离心的条件包括：3000-5000r/min，2-6℃，8-12min。

8.根据权利要求1-7中任意一项所述的人参皂苷-短双歧杆菌M-16V微胶囊的制备方法，其特征在于，所述微胶囊的制备包括：。

用无菌注射器将菌悬液挤压入磁力搅拌的无菌CaCl₂溶液中；

所述常温下固化的时间为20-40min；

所述水冲洗的次数为1-3次；

所述干燥为冻干或喷雾干燥。

9.由权利要求1-8中任意一项所述的制备方法得到的人参皂苷-短双歧杆菌M-16V微胶囊。