[发明专利]蒙脱石散微生物限度检查方法

说明书

本发明涉及一种蒙脱石散微生物限度检查方法，通过在中国药典2015版的基础上增加了金黄色葡萄球菌、耐胆盐革兰阴性菌的检测方法以及引入菌种API鉴定方法并且调整控制菌的培养时间，大大增加了控制菌的检出率，显著提高了检测结果的准确信和用药的安全性。本发明方法检测的产品已经通过欧盟GMP认证，满足国际市场的需求。

技术领域

本发明涉及药品的微生物限度检查方法，更具体地，涉及一种蒙脱石散微生物限度检查方法。

背景技术

蒙脱石(Montmorillonite)是由颗粒极细的含水铝硅酸盐构成的层状矿物，也称胶岭石、微晶高岭石。它是由火山凝结岩等火成岩在碱性环境中蚀变而成的膨润土的主要组成部分。蒙脱石最早由法国博福-益普生公司开发为蒙脱石散，商品名为思密达，临床用于成人及儿童急、慢性腹泻以及用于食道、胃、十二指肠疾病引起的相关疼痛症状的辅助治疗。

目前，根据中国药典2015版对于矿物质药及口服制剂的要求，蒙脱石散微生物限度需要检验的项目有：需氧菌、霉菌及酵母菌、大肠埃希菌、沙门菌。然而，由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒占食源性微生物食物中毒事件的25％左右，金黄色葡萄球菌成为仅次于沙门氏菌和副溶血杆菌的第三大微生物致病菌，耐胆盐革兰阴性菌指在胆汁酸中可以存活并繁殖的革兰阴性菌。本发明的蒙脱石散在中国药典2015版的基础上增加了金黄色葡萄球菌、耐胆盐革兰阴性菌的检查，使得控制菌检查项目涵盖了常见的且具有代表性的食源性致病菌，提高了用药安全性，使蒙脱石散的品质更符合市场需求。

CN103073010B公开了蒙脱石的环保生产工艺，其对制备的蒙脱石进行了微生物检测，其中微生物包括细菌、霉菌和酵母菌、大肠埃希菌、活螨。该专利并未公开对蒙脱石产品需要进行金黄色葡萄球菌和耐胆盐革兰阴性菌的限度检查。

本发明提供了一种蒙脱石散微生物限度检查方法，使蒙脱石散在生产和使用中有效的保证产品质量，进而保证药品安全有效。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种蒙脱石散微生物限度检查方法，该方法检出的微生物种类包括需氧菌、霉菌及酵母菌、大肠埃希菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌、耐胆盐革兰阴性菌，弥补了现有技术未检测金黄色葡萄球菌和耐胆盐革兰阴性菌的缺陷，提高了用药安全性。另外，本发明通过选择菌种的培养时间，大大地增加了控制菌的检出率；为了鉴定培养基上的菌落，本发明引入菌种API鉴定方法进行纯化鉴定以确定其是否属于目标菌，该鉴定试剂能对检出的菌株进行了更深入的鉴定。

本发明的蒙脱石散的微生物限度检验项目有：需氧菌、霉菌及酵母菌、大肠埃希菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌和耐胆盐革兰阴性菌。需氧菌、霉菌及酵母菌的检验方法为平皿法，大肠埃希菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌和耐胆盐革兰阴性菌的检查方法为常规法。

本发明的目的是这样实现的：一种蒙脱石散微生物限度检查方法，包括微生物限度检查步骤，微生物限度检查方法具体为：

(1)需氧菌总数计数

取供试液，置无菌平皿中，注入温度不超过45℃的溶化的胰酪大豆胨琼脂培养基，在30℃～35℃下倒置培养3-5天，每个稀释级分别做2-3个平皿，取平均值计算菌落数。

(2)霉菌及酵母菌计数

取供试液，置无菌平皿中，注入温度不超过45℃的溶化的沙氏葡萄糖琼脂培养基，在20℃～25℃下倒置培养5-7天，每个稀释级别做2-3个平皿，取平均值计算菌落数。

(3)大肠埃希菌检查

取本品，置胰酪大豆胨液体培养基中，混匀，即得供试液；取供试液，接种至胰酪大豆胨液体培养基中，30～35℃培养18～24小时，再取胰酪大豆胨液体培养物接种至麦康凯液体中，在42～44℃下培养24～48h，取麦康凯液体培养物在麦康凯琼脂培养基平板上划线进行次代培养，在30～35℃下培养18～72h，优选地，在30～35℃下培养48～72h，更优选地，在30～35℃下培养72h；