[发明专利]一种平衡玻璃化冷冻试剂及其应用

权利要求书

1.一种平衡玻璃化冷冻试剂的应用，其特征在于：平衡玻璃化冷冻试剂在冷冻离体胚胎中的应用；

所述冷冻离体胚胎于干冰（-78℃）中运输或储存；

所述平衡玻璃化冷冻试剂按体积百分比计：乙二醇（EG）10%、二甲基亚砜（DMSO）10%、聚蔗糖-蔗糖-磷酸盐缓冲液（FS）80%；

所述聚蔗糖-蔗糖-磷酸盐缓冲液（FS）为30g聚蔗糖（Ficoll）和17.12g蔗糖（Sucrose），经平衡磷酸盐缓冲液（PB1）定容至100ml；

1）将平衡玻璃化冷冻试剂和解冻液分段装入胚胎冷冻麦管中；

2）将胚胎转移至平衡磷酸盐缓冲液（PB1）中清洗三次，将胚胎转移至冷冻前平衡液(ED)中，清洗四次，并静置2分钟；

3）将胚胎移入平衡玻璃化冷冻试剂中清洗三次，然后将胚胎移入麦管最末端的平衡玻璃化冷冻试剂中封口，投入液氮；

4）麦管在液氮中存放3分钟后转入干冰（-78℃）中运输或储存。

2.按权利要求1所述平衡玻璃化冷冻试剂的应用，其特征在于：

冷冻前平衡液(ED)按体积百分比计为：乙二醇（EG）3-10%、二甲基亚砜（DMSO）3-10%、平衡磷酸盐缓冲液（PB1）80-94%；

解冻液为0.5M蔗糖溶液。

3.按权利要求2所述平衡玻璃化冷冻试剂的应用，其特征在于：

冷冻前平衡液(ED) 按体积百分比计为：5%乙二醇（EG）、5%二甲基亚砜（DMSO）和90%平衡磷酸盐缓冲液（PB1）。