[发明专利]一种量子点与重组人内皮抑制素偶联物及其制备工艺

说明书

本发明提供一种量子点与重组人血管内皮抑制素偶联物及其制备工艺，本发明采用量子点通过碳二亚胺法与目标蛋白重组人血管内皮抑制素进行反应，通过调整偶联摩尔比以及偶联的环境等实现量子点与重组人血管内皮抑制素的偶联以达到其最高偶联效率，本发明所述偶联制备工艺制备的量子点与重组人血管内皮抑制素偶联物，能够大大提高量子点与重组人血管内皮抑制素的偶联效率，可为研究重组人血管内皮抑制素的体内示踪提供依据；并且本发明的制备方法生产成本低、制备工艺简单、适用于大规模的工业化生产。

技术领域

本发明属于药物领域，具体涉及一种量子点与重组人血管内皮抑制素偶联物及其制备工艺。

背景技术

重组人血管内皮抑制素rhEndostatin,rh-ES目前在临床上广泛应用，但由于上市的只有普通的注射剂，其稳定性比较差，需要频繁的给药。而传统偶联制备工艺如静电吸附，虽然操作简单、无需添加其它反应试剂，但该方法制备的复合物稳定性较差，偶联效率低且长期保存困难，严重影响其活性，难以实现成药性，并且靶向性评价困难。所以需要新型的较温和的制备工艺，降低对蛋白活性的影响，与此同时蛋白给药体系的构建以及对其靶向性进行评价，这些都是重组人血管内皮抑制素新型剂型研究的关键所在。

发明内容

针对上述技术问题，本发明提供一种量子点与重组人血管内皮抑制素偶联物及其制备工艺，以量子点QDs为成像材料，通过将QDs与重组人血管内皮抑制素rh-ES进行共价结合，得到蛋白与量子点结合的复合物，使该复合物具有量子点的荧光特性和蛋白类药物的生物活性。共价结合是量子点的羧基与蛋白的氨基通过缩合反应形成共价键，结合力强，得到的复合物稳定性好并且光学性能保持较好。本发明将重组人血管内皮抑制素与量子点等示踪剂通过碳二亚胺法进行偶联，反应条件比较温和不会对蛋白活性产生影响且有利于后期的靶向性评价。本发明提供的量子点与重组人血管内皮抑制素偶联物制备工艺偶联效率较高。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种量子点与重组人血管内皮抑制素偶联物制备工艺，包括以下步骤：

偶联物以量子点作为示踪剂，以重组人血管内皮抑制素为模型药，将活化后的量子点与重组人血管内皮抑制素蛋白进行偶联反应，制备得到量子点与重组人血管内皮抑制素偶联物。

上述方案中，所述量子点的活化步骤具体为：

取量子点QDs溶液，稀释后，分别加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐EDC 和N-羟基硫代琥珀酰亚胺NHS，以活化量子点表面的羧基，得到溶液A；

所述量子点与1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐EDC的摩尔比例为1:500～5000；

所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐EDC与N-羟基硫代琥珀酰亚胺NHS的偶联摩尔比例为1：1。

上述方案中，所述量子点QDs与重组人血管内皮抑制素蛋白进行偶联反应的步骤具体为：

将溶液A中加入重组人血管内皮抑制素蛋白溶液进行偶联反应，将标记蛋白与未标记蛋白分离纯化，得到溶液B。

进一步的，所述重组人血管内皮抑制素蛋白溶液的浓度为5mg/mL。

进一步的，所述量子点QDs与重组人血管内皮抑制素的摩尔比例1:1～2.5。

进一步的，所述偶联反应的时间为1～4h。

进一步的，所述量子点为水溶性量子点。

上述方案中，还包括以下步骤：

将溶液B中加入体积质量百分比为2％牛血清蛋白BSA溶液涡旋2min，用来闭合量子点表面未与1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐EDC与N-羟基硫代琥珀酰亚胺NHS 偶联的羧基。