[发明专利]一种免疫传感器的制备及用于FSH抗体检测的方法

权利要求书

1.一种基于碳量子点的电化学发光免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

将直径为5mm的玻碳电极(GCE)在铺有0.5μm的氧化铝粉末的抛光布上机械打磨抛光，先用二次水洗去表面残留粉末，再用乙醇清洗，再移入超声水浴中清洗，氮气吹干；

在玻碳电极上滴涂10μL浓度为1.5mg/mL的AgNPs/CQDs-PEI-GO的溶液，室温下晾干，得到AgNPs/CQDs-PEI-GO修饰的玻碳电极；

用PBS冲洗AgNPs/CQDs-PEI-GO修饰的玻碳电极，滴涂20μLFSH抗体(anti-FSH)在修饰的玻碳电极表面并在4℃冰箱中孵育10h，用去离子水洗去物理吸附的anti-FSH，制得AgNPs/CQDs-PEI-GO/anti-FSH修饰的玻碳电极；

在AgNPs/CQDs-PEI-GO/anti-FSH修饰的玻碳电极上滴涂30μL浓度为1.0wt.％的BSA，以封闭电极表面上非特异性活性位点，并保存在4℃冰箱中；

取20μL浓度为10ng/mL～100ng/mL的anti-FSH标准溶液滴于AgNPs/CQDs-PEI-GO/anti-FSH修饰电极表面并在4℃冰箱中孵育10h，用PBS缓冲溶液冲洗电极表面，制得一种基于AgNPs/CQDs-PEI-GO电化学发光免疫传感器。

2.根据权利要求1所述的基于碳量子点的电化学发光免疫传感器的制备方法，其特征在于，所述AgNPs/CQDs-PEI-GO材料由以下方法制备：

(1)CQDs的制备

称取100～200g橘子经榨汁机搅拌后得到悬浮液，取30mL橘子汁和40mL乙醇于200mL水热反应釜中，置于烘箱中200℃加热6h，反应完全后冷却至室温，过滤残渣，将滤液离心后再用微孔滤膜过滤，再用冷冻干燥机对溶液进行冷冻干燥约72h，得到微黄色粉末，储存于4℃冰箱中保存备用；

(2)PEI-GO的制备

称量0.2g GO溶于300mL二次水中，超声30min；加入0.1g PEI，50℃加热回流10h，冷却至室温，所得产物离心、洗涤，最终溶于水中备用；

(3)AgNPs/CQDs-PEI-GO的制备

取20mL CQDs加入到PEI-GO溶液中，100℃加热回流2h，所得溶液离心洗涤后，然后加入0.1mL和1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二酰亚胺和N-羟基丁二酰亚胺(5:1)的混合溶液，搅拌5min；加入5mL AgNPs后继续搅10h；得到的产物为AgNPs/CQDs-PEI-GO，离心、洗涤后溶于PBS中。

3.根据权利要求1所述的一种电化学发光免疫传感器使用方法，所述电化学发光免疫传感器采用权利要求1所述的制备方法制备，其特征在与，包括如下步骤：

使用电化学工作站用三电极体系，Ag/AgCl做参比电极，铂丝做对电极，AgNPs/CQDs-PEI-GO/anti-FSH做工作电极，检测工作在5mL含有0.1mol/L K₂S₂O₈和0.1mol/L KCl的PBS溶液中进行,光电倍增管设置800V，扫描电压-1.8V～-0.2V，扫速200mV s。

4.一种采用电化学发光免疫传感器检测FSH抗体的方法，所述电化学发光免疫传感器为采用权利要求1所述的电化学发光免疫传感器，其特征在于，所述检测方法包括：

FSH抗体的检测由三部分分析组成：筛选实验、确证实验和滴定实验；

(1)筛选实验是检测样本中是否为FSH抗体潜在阳性，用AgNPs/CQDs-PEI-GO电化学发光免疫传感器得到FSH抗体的最低检出限，如浓度大于最低检出限，需要进一步通过确证实验验证；

(2)对不同浓度的anti-FSH标准溶液进行检测，通过所得的电致化学发光强度与anti-FSH标准溶液浓度之间的关系，绘制工作曲线；

(3)待测样品溶液代替anti-FSH标准溶液进行检测，检测的结果可通过工作曲线查得。