[发明专利]一种GLP-1类似物的纯化方法

说明书

本发明公开了一种GLP‑1类似物的纯化方法，包括以下步骤：1)采用阴离子交换对GLP‑1类似物进行纯化；2)采用反相色谱对1)所得纯化物质进行纯化。第一步纯化时，采用的是更为环保、溶剂成本更低、载量更大的阴离子交换纯化技术，实现了对目标物富集的同时，与反相色谱技术形成了互补，去除了反相纯化时难除的氨基酸缺失杂质，同时降低了成本和环保压力；第二步纯化时，再采用高分辨率的反相纯化技术，去除阴离子交换纯化无法除去的异构体杂质和副反应杂质等，最终得到纯度≥99.0％、单杂≤0.15％的GLP‑1类似物。

技术领域

本发明属于纯化方法技术领域，具体涉及一种GLP-1类似物的纯化方法。

背景技术

胰高血糖素样肽-1，简称GLP-1，是回肠内分泌细胞分泌的一种脑肠肽，是目前2型糖尿病药物作用的重要靶点之一。GLP-1具有抑制胃排空和减少肠胃蠕动的效果，因此有助于饮食控制和减轻体重。由于天然的GLP-1容易被人体内的二肽基肽酶IV(DPP-IV)降解，因此，制药企业开发了多种GLP-1类似物，如索玛鲁肽、利拉鲁肽等。

由于GLP-1类似物的肽链较长，且可能会经过侧链修饰，因此在化学合成的过程中会产生较多的杂质，如异构体杂质、氨基酸缺失或增加杂质、副反应杂质等。目前对于化学合成的GLP-1类似物，主要是通过两步或以上的反相色谱纯化，才能制备得到纯度≥99.0％、单杂≤0.15％的精肽。例如，专利CN 106749613A采用三步反相纯化、专利CN108640985A采用两步反相纯化得到索玛鲁肽精肽，专利CN 107903318A和专利CN109438569A均采用两步反相纯化得到利拉鲁肽精肽。反相色谱固然有很强的分离能力，但同时也伴随着大量有机溶剂的使用和有机废液的产生，其在环境污染、废液回收处理和生产成本等方面并不占优势。

在本发明中，第一步先采用阴离子交换进行纯化，第二步再采用反相色谱进行纯化，可得到纯度≥99.0％、单杂≤0.15％的索玛鲁肽和利拉鲁肽。第一步的阴离子交换纯化，载量大，实现对目标物富集的同时，与第二步的反相纯化形成互补，除去了反相纯化时难除的氨基酸缺失杂质；此外，阴离子交换纯化时无需使用有机溶剂，在降低生产和废液处理成本的同时，也更为环保。第二步再采用高分辨率的反相色谱纯化，最终得到纯度≥99.0％、单杂≤0.15％的索玛鲁肽和利拉鲁肽。

发明内容

为了解决上述背景技术中所提出的问题，本发明的目的在于提供一种GLP-1类似物的纯化方法。在本发明中，第一步纯化时，采用的是更为环保、溶剂成本更低、载量更大的阴离子交换纯化技术，实现了对目标物富集的同时，与反相色谱技术形成了互补，去除了反相纯化时难除的氨基酸缺失杂质，同时降低了成本和环保压力；第二步纯化时，再采用高分辨率的反相纯化技术，去除阴离子交换纯化无法除去的异构体杂质和副反应杂质等，最终得到纯度≥99.0％、单杂≤0.15％的索玛鲁肽和利拉鲁肽。

为了达到上述目的，本发明所采用的技术方案为：一种GLP-1类似物的纯化方法，包括以下步骤：

1)采用阴离子交换对GLP-1类似物进行纯化；

2)采用反相色谱对1)所得纯化物质进行纯化。

进一步地，步骤1)前还包括将GLP-1类似物溶解并过滤。

进一步地，所述GLP-1类似物溶解所用的溶剂为Tris、磷酸氢二钾、磷酸氢二钠、磷酸氢二铵、碳酸氢铵、醋酸铵中的一种，浓度为10～30mM，pH为7～9。

进一步地，所述GLP-1类似物为索玛鲁肽或利拉鲁肽。

进一步地，所述阴离子交换纯化采用的是强阴离子交换填料，粒径10～30μm，孔径

进一步地，所述阴离子交换纯化时，缓冲盐体系为Tris、磷酸氢二钾、磷酸氢二钠、磷酸氢二铵、碳酸氢铵、醋酸铵中的一种，浓度为10～30mM，pH为7～9；洗脱时用的盐为NaCl，洗脱梯度为0～1.0M。通常用的是缓冲盐体系对应的酸或碱来调节pH。