[发明专利]拟康宁木霉T-51菌株在西瓜枯萎病防治中的应用

说明书

本发明公开了一株拟康宁木霉T‑51菌株在西瓜枯萎病生物防治中的应用。本发明的拟康宁木霉T‑51菌株分生孢子悬浮液能够显著抑制苗期西瓜枯萎病。拟康宁木霉T‑51菌株的液体培养物滤液能够抑制西瓜枯萎病菌的菌丝生长。拟康宁木霉T‑51菌株在PDA上生长产生的挥发性物质能够抑制西瓜枯萎病菌的菌丝生长和分生孢子萌发。

技术领域

本发明涉及植物病害生物防治技术领域，具体地说涉及拟康宁木霉T-51菌株在西瓜枯萎病防治中的应用。

背景技术

木霉菌是广泛存在于自然界的一种真菌。木霉菌(Trichoderma spp.)属于半知菌亚门，丝孢纲，丛梗孢目，丛梗孢科。木霉菌广泛存在于土壤、根围、叶围、种子等生态环境中，也是一种优良的生防菌。由于木霉菌的广泛适应性、广谱性和多机制性，因此该菌一直是植物病害生物防治研究的重点对象。

西瓜枯萎病是由尖孢镰刀菌西瓜专化型(Fusarium oxysporum f.sp.niveum)引起造成西瓜连作障碍的重要病害，在西瓜设施栽培生产中危害尤为严重。长期以来，西瓜枯萎病防治主要依赖于轮作和化学药剂。但由于西瓜栽培面积逐渐扩大，能够用于轮作的空间越来越少，并且化学药剂的过量使用严重污染农产品和生态环境，危及人畜健康。因此，近年来生物防治正日益成为西瓜枯萎病防控中的一条重要的途径。

发明内容

本发明的目的首先在于提供一种拟康宁木霉(Trichoderma koningiopsis)T-51菌株，其保藏编号为：CCTCC NO：M 2015729。

该菌株分离自湖北武汉地区油菜田土壤中，该菌种已于2015年12月8日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)；保藏地点为：中国、武汉、武汉大学。

该拟康宁木霉T-51菌株置于葡萄糖马铃薯琼脂培养基PDA上培养一周，菌丝发达、产生大量气生菌丝，产生蓬松茂密的产孢簇，呈浅绿色至深绿色，无可溶性色素，无明显气味，最适生长温度为24～30℃，光照条件有利于其生长和产孢。

本发明还提供了上述拟康宁木霉菌株T-51菌在防治西瓜枯萎病中的应用；具体的说，使用拟康宁木霉菌株T-51分生孢子悬浮液接种于西瓜根际土壤中，可防治西瓜苗期枯萎病。

其中所述的拟康宁木霉T-51菌株分生孢子悬浮液，是通过如下制备方法制备得到的：

1)将拟康宁木霉T-51菌株接种在PDA培养基上培养，得到拟康宁木霉T-51菌株菌落；

2)将步骤1)得到的拟康宁木霉T-51菌株菌落边缘菌丝接种到PDA培养皿上培养；

3)在步骤2)的培养皿中加入无菌水，刮洗菌落表面的分生孢子，混匀，即得到拟康宁木霉T-51菌株分生孢子悬浮液；

其中所述步骤1)中，培养条件为在温度为20℃，光照条件下培养2天；

所述步骤2)中，培养条件为在温度为20℃，光照条件下培养2天。

其中，PDA培养基的配方：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂粉11g,补充蒸馏水至1000ml。

PDA制作方法：将洗净后去皮的马铃薯切片，加水800ml煮沸约半小时，用纱布滤去马铃薯，然后加入葡萄糖20g，将11g琼脂粉加200ml水搅拌均匀，加入上述溶液中，再加水补足至1000ml，搅拌溶解后分装灭菌。

本发明还提供了一种利用拟康宁木霉T-51菌株制备抑制西瓜枯萎病菌生长的滤液，其是通过如下方法制备的：

1)将拟康宁木霉T-51菌株接种在PDA培养基上培养，得到拟康宁木霉T-51菌株菌落；

2)将步骤1)得到拟康宁木霉T-51菌落边缘的菌丝块接种至PDB培养液中培养，得到培养物；