[发明专利]一种鉴别银杏幼苗性别的血清学方法

说明书

本发明涉及生物学鉴定技术领域，具体揭示了一种鉴别银杏幼苗性别的血清学方法，包括制备已知性别的银杏成年植株组织提取液，分别用雌雄株的银杏成年植株组织提取液注射家兔进行免疫程序，提取家兔血液得到血清，然后将血清与相反性别的雌雄株的银杏成年植株组织充分混合，利用混合溶液离心后获得的雌雄株的特异性银杏性别鉴定抗血清，在琼脂扩散凝集试验中鉴定得到待检测的银杏幼苗的性别；相比目前的多种鉴定方法，操作难度小，简便易行，且较少使用价格昂贵或毒性大的药品，而且容易量产。

技术领域

本发明涉及生物学鉴定技术领域，具体为一种鉴别银杏幼苗性别的血清学方法。

背景技术

银杏雌雄异株，是一种集食用、药用、材用、保健、观赏、生态防护于一体的多用途特种经济生态树种。在集约化果园中，为了提高白果产量，绝大多数应为雌株，同时也需要少量雄株，以便于授粉受精。而在城市绿化过程中，由于银杏雌株种子成熟落下腐烂后会产生一种特殊的臭味，因此只宜种植雄株，不宜种植雌株。换言之，不同性别的银杏具有不同的用途，需要运用得当。因此银杏幼苗性别的早期鉴定，对农林生产和城市建设都有重要现实意义和生态意义。

前人已经对银杏性别鉴别开展多年研究，提出了许多实用便捷的方法，也有的一些理论性探讨，包括染色体核型区别鉴定，抗氧化酶及其同工酶谱鉴别，化学药剂耐性区别鉴定，特异蛋白质鉴定以及基因鉴别等多种方式，均为银杏雌雄鉴别提供了有力依据。但上述鉴定方法普遍操作工序复杂，需要多种价格昂贵或毒性较大的鉴定药品，而且对仪器设备要求高，要有较高专业知识的人操作，普通实验室难以进行，因此上述方法均不宜在集约化种植或城市园林绿化工程等领域推广。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供一种鉴别银杏幼苗性别的血清学方法，具备操作难度小，简便易行，推广泛用性高，且成本低廉，造成污染和毒害小等优点，解决了现有的多种鉴定方法普遍操作工序复杂，鉴定药品成本高昂或毒性较大，不利于推广的问题。

本发明的一种鉴别银杏幼苗性别的血清学方法，包括以下步骤，

S1制备已知性别的银杏成年植株组织提取液；

S2分别用步骤S1中得到的雌雄株的银杏成年植株组织提取液注射家兔进行免疫程序；

S3检测步骤S2中免疫家兔的抗血清效价为1：64以上时，提取家兔血液，滤除其中的血红蛋白质，得到血清；然后将血清与相反性别的步骤S1中获得的雌雄株的银杏成年植株组织充分混合；再将混合溶液离心，滤除其中的沉淀，则分别获得雌雄株的特异性银杏性别鉴定抗血清；

S4利用步骤S3中获得雌雄株的特异性银杏性别鉴定抗血清，在琼脂扩散凝集试验中鉴定得到待检测的银杏幼苗的性别。

本发明的一种鉴别银杏幼苗性别的血清学方法，其中步骤S1包括以下步骤，

S11分别采集已知性别的成年银杏植株组织；

S12在步骤S1中获得的成年银杏植株组织内加入pH值为8.3的Tir-HCl缓冲液和石英砂，然后进行研磨以获得组织提取液；

S13将步骤S12中得到的组织提取液进行离心处理10min，离心机转速为2000rpm，然后取上清液，加入浓度为1%的凡士林继续研磨匀浆，制备成凝胶乳剂。

本发明的一种鉴别银杏幼苗性别的血清学方法，其中步骤S2中的家兔免疫程序为，选取两只家兔，分别向体内注射银杏成年植株组织提取液，每只兔子均注射8至10个点，每个点的注射量为0.1至0.2ml；等待4至7天后，再次注射以加强免疫一次。

本发明的一种鉴别银杏幼苗性别的血清学方法，其中家兔免疫程序可以进行两次以上的加强免疫注射，以提高抗体效价。

本发明的一种鉴别银杏幼苗性别的血清学方法，其中步骤S3包括以下步骤，