[发明专利]一种褐藻胶裂解酶及其在褐藻胶定量检测中的应用有效
| 申请号： | 201911319111.8 | 申请日： | 2019-12-19 |
| 公开（公告）号： | CN110904084B | 公开（公告）日： | 2023-05-05 |
| 发明（设计）人： | 常耀光;曹斯琦;薛长湖;裴晓洁;张玉莹;申晶晶;王玉明;李兆杰;唐庆娟 | 申请（专利权）人： | 中国海洋大学 |
| 主分类号： | C12N9/80 | 分类号： | C12N9/80;C12N15/60;G01N21/33 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 266101 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 褐藻 裂解 及其 定量 检测 中的 应用 | ||
【权利要求书】：
1.一种褐藻胶裂解酶在褐藻胶定量检测中的应用，其特征在于：为褐藻胶裂解酶Aly7A，其氨基酸序列为SEQ ID NO.1。
2.一种褐藻胶定量检测的方法，其特征在于：所采用的褐藻胶裂解酶为权利要求1中的褐藻胶裂解酶Aly7A。
3.如权利要求2所述的褐藻胶定量检测的方法，其特征在于：检测反应前后反应体系在235nm处的吸光值增量。
4.如权利要求2所述的褐藻胶定量检测的方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)褐藻胶溶液的配制：称取化学级或以上纯度的褐藻胶溶于缓冲液，制备具有浓度梯度的褐藻胶溶液；
(2)定量标准曲线的绘制：取上述配制的不同浓度褐藻胶溶液分别与褐藻胶裂解酶Aly7A的酶液混合进行反应；反应后灭活，冷却至室温后离心取上清液，测定上清液在235nm处的吸光值；同时，将灭活酶液与褐藻胶溶液混合，离心后取上清，测定其在235nm处的吸光值作为对照，从而计算出不同浓度褐藻胶酶解后在235nm处的吸光值增量；然后以褐藻胶浓度为横坐标，以各样品的吸光值增量为纵坐标，通过线性拟合得出特定反应条件下的标准曲线；
(3)样品测定：样品前处理后加入褐藻胶裂解酶Aly7A进行反应，反应后离心取上清液，测定反应前后反应体系在235nm处的吸光值增量；将吸光值增量代入相应反应条件下的标准曲线，计算出反应体系中的褐藻胶浓度，进而折算出褐藻胶含量。
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