[发明专利]一种斑马鱼胚胎全氟化合物内暴露模型的构建方法及应用

权利要求书

1.一种斑马鱼胚胎全氟化合物内暴露模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

搭建显微注射系统平台；

配制含全氟化合物的样品溶液，所述全氟化合物包括全氟羧酸类化合物和全氟磺酸类化合物中的一种或多种；

选取处于卵裂期的斑马鱼胚胎，利用所述显微注射系统平台，将所述样品溶液注射至所述斑马鱼胚胎的植物极内。

2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述显微注射系统平台包括：拉针仪、持针器、显微操纵器、显微注射器和体视显微镜；其中，所述拉针仪用于将毛细管拉制成注射针；所述持针器用于固定所述注射针；所述显微操纵器用于调控所述注射针在显微注射过程中位置；所述显微注射器用于给所述注射针施加注射压，以将所述待测样品溶液注射至所述斑马鱼胚胎内；所述体视显微镜用于在显微注射过程中观察和聚焦所述注射针及所述斑马鱼胚胎。

3.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述全氟羧酸类化合物包括全氟丁酸、全氟戊酸、全氟己酸、全氟庚酸、全氟辛酸、全氟壬酸、全氟癸酸、全氟十一酸、全氟十二酸、全氟十三酸、全氟十四酸、全氟十六酸和全氟十八酸中的一种或多种；所述全氟磺酸类化合物包括全氟丁烷磺酸、全氟己烷磺酸、全氟辛烷磺酸和全氟癸烷磺酸中的一种或多种。

4.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述配制含全氟化合物的样品溶液的过程包括：称取全氟化合物固体粉末，然后加入去离子水，混合溶解后得到所述含全氟化合物的样品溶液。

5.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述待测样品溶液的注射剂量体积小于或等于所述斑马鱼胚胎体积的10％。

6.如权利要求1或5所述的构建方法，其特征在于，所述斑马鱼胚胎的植物极内，所述全氟化合物的注射质量为0.1ng-50ng。

7.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述选取处于卵裂期的斑马鱼胚胎的过程包括：按照雌:雄为(1-2):1的比例将成年斑马鱼放置于配种缸内，混合并让所述成年斑马鱼进行交配，然后收集所述配种缸底部的鱼卵，经分选、洗净后获得卵裂期的斑马鱼胚胎，将所述卵裂期的斑马鱼胚胎置于平板培养皿中，并清除所述平板培养皿内的其他异物和水。

8.一种全氟化合物胚胎发育毒性的评价方法，其特征在于，包括：按如权利要求1-7任一项所述斑马鱼胚胎全氟化合物内暴露模型的构建方法构建斑马鱼胚胎全氟化合物内暴露模型，然后将经注射后的所述斑马鱼胚胎转移至养殖水中恒温培养，观察和记录所述斑马鱼胚胎发育过程中形态学变化。

9.如权利要求8所述的评价方法，其特征在于，所述观察和记录所述斑马鱼胚胎发育过程中形态学变化的过程包括：观察所述斑马鱼胚胎发育过程，并记录所述斑马鱼胚胎发育过程中的死亡率和畸形率。

10.如权利要求8所述的评价方法，其特征在于，配制不同溶度梯度的所述含全氟化合物的样品溶液，分别将不同溶度梯度的所述样品溶液注射至各自对应的斑马鱼胚胎的植物极内。