[发明专利]混菌二次发酵技术及其在L-丙氨酸工业化生产中的应用

权利要求书

1.混菌二次发酵技术及其在L-丙氨酸工业化生产中的应用，其特征在于该方法涉及两株不同属的菌种在同一发酵条件下实现发酵共同发酵，且高表达酶，能够在相同的催化条件下实现L-丙氨酸的生产。

2.根据权利要求1所述，其特征在于经过诱变的发酵菌种菌大肠杆菌(Escherichiacoli)CGMCC 9850和睾丸酮丛毛单胞菌(Comamonas testosteroni)CGMCC 6083具备催化条件统一性。

3.根据权利要求1所述，其特征在于发酵培养基经过优化后，两株菌可实现同步生长，混菌发酵，关键过程为：

(1)分别以种子培养基培养菌大肠杆菌CGMCC 9850和睾丸酮丛毛单胞菌CGMCC 6083；

(2)配置混菌一次发酵培养基，配方为(g/L)蛋白胨5-10，玉米浆干粉10-20，谷氨酸钠6-10，硫酸镁0.1-0.3，磷酸氢二钾0.5-1.5，以NaOH调pH至6.5-7.5；

(3)接种睾丸酮丛毛单胞菌CGMCC 6083，36℃培养6-10h；

(4)接种大肠杆菌CGMCC 9850后，补加富马酸10g/L，以氨水调pH至6-7，继续培养8-15h，获得发酵液。

4.根据权利要求3所述，其特征在于最佳的混菌一次发酵培养基配方为(g/L)蛋白胨8.5玉米浆干粉15，谷氨酸钠8.0硫酸镁0.2，磷酸氢二钾1.0，以NaOH调pH至7.0。二次发酵最佳补料浓度为：富马酸10g/L，氨水调节pH至6.5。

5.根据权利要求3所述，其特征为一次发酵最佳时间为8h，二次发酵最佳时间为12h。

6.根据权利要求3所述，其特征在于混菌二次发酵后，发酵液L-天冬氨酸酶的酶活力达4900U/mL，天冬氨酸脱羧酶活力达26000U/mL。

7.根据权利要求5所述，获得的高酶活力的发酵液，其特征在于在pH6.0-8.0范围内，L-天冬氨酸酶酶活力均可达4800U/mL。

8.根据权利要求5所述，其特征在于以二次发酵的发酵液作为酶源，催化富马酸和氨水，可实现双酶催化，一步获得L-丙氨酸，摩尔转化率达98.6％，催化时间为8h，催化效率提升300％。