[发明专利]一种制备分离的珊瑚组织和共生虫黄藻预处理样品的方法

权利要求书

1.一种制备分离的珊瑚组织和共生虫黄藻预处理样品的方法，其特征在于，包括以下步骤：

a.灼烧铝箔和GF/F滤膜，备用；

b.用洗牙器冲洗去除珊瑚顶端所有组织，收集冲洗液；珊瑚骨骼干燥备用；

c.将步骤b得到的冲洗液离心，去除上清液，保留沉淀B₁；

d.往沉淀B₁中加入去离子水，然后进行超声破碎，离心，分离上清液A₁和沉淀B₂；

e.往沉淀B₂中加入去离子水，离心，分离上清液A₂和沉淀B₃；

f.将上清液A₁和上清液A₂合并，离心，分离上清液A₃和沉淀B₄；

g.在显微镜下用血球计数板观察上清液A₃，确认共生虫黄藻细胞与珊瑚组织分离完全；

h.将上清液A₃用预烧过的GF/F滤膜抽滤、吸干，并用已灼烧过的铝箔包裹，置于低温冷冻干燥器过夜干燥12-24h，得到珊瑚组织预处理样品，然后储存在-80℃冰箱备用；

i.往沉淀B₄中加入去离子水，离心，保留沉淀B₅；

j.往沉淀B₅中加入盐酸振荡混匀去除碳酸盐，离心，保留沉淀B₆；

k.往沉淀B₆中加入适量去离子水，抽滤，然后包裹在已灼烧过的铝箔中，置于低温冷冻干燥器过夜干燥12-24h，得到共生虫黄藻预处理样品，然后储存在-80℃冰箱备用；

所述的步骤c中离心转速为4000r/min，离心时间为5min；

所述的步骤d中超声破碎形式设置为破碎3s、停3s，破碎总时间为10min；所述的步骤d中离心转速为400r/min，离心时间为5min；

所述的步骤e中离心转速为4000r/min，离心时间为5min；

所述的步骤f中离心转速为4000r/min，离心时间为30min；

所述的步骤i中离心转速为4000r/min，离心时间为5min；

所述的步骤j中离心转速为4000r/min，离心时间为5min。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤a中的灼烧是450℃灼烧至少2h。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤b中珊瑚骨骼干燥是在烘箱60℃烘24h。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤j的盐酸为分析纯盐酸。