[发明专利]一种恩度体内控释药物及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种恩度体内控释药物，其特征在于：所述控释药物采用红细胞包载恩度；所述红细胞表面修饰葡萄糖氧化酶；所述恩度的包载浓度为10～21.7U/10¹⁰cells。

2.根据权利要求1所述的恩度体内控释药物，其特征在于：所述恩度的包载浓度为21.23±0.46U/10¹⁰cells。

3.根据权利要求2所述的恩度体内控释药物，其特征在于：所述红细胞表面修饰的葡萄糖氧化酶的浓度为0.17±0.04mg/10¹⁰cells。

4.权利要求1至3任一所述恩度体内控释药物的制备方法，其特征在于：所述恩度体内控释药物通过以下步骤制备：

(1)红细胞包载恩度：采用低渗-电穿孔法进行红细胞包载恩度，获得载药红细胞；

(2)生物素化葡萄糖氧化酶：生物素对葡萄糖氧化酶进行修饰；

(3)葡萄糖氧化酶修饰：将生物素化的葡萄糖氧化酶修饰在步骤(1)制备得到的载药红细胞表面。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)低渗-电穿孔法进行红细胞包载恩度包括以下步骤：

a、低渗：将红细胞离心，并在含有恩度的低渗溶液中重悬；低渗处理条件为：4℃下处理1-3小时；所述低渗溶液中恩度的浓度为5.0mg/mL；

b、电穿孔：将步骤a中处理后的红细胞于脉冲电压1200V，脉宽0.01ms下脉冲处理3次，每次10s；

c、高渗：将电穿孔后的载药红细胞离心，重悬于高渗溶液中，在37℃下放置30-60分钟；

d、等渗：在PBS缓冲液中洗涤两次以除去未包封的恩度，即得所述载药红细胞。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于：所述步骤a中处理时间为3小时。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于：所述步骤a中的低渗溶液采用15mMNaH₂PO₄·2H₂O，15mM NaHCO₃，2mM ATP，3mM还原型谷胱甘肽，20mM葡萄糖，5mM NaCl，72mOsm/Kg；所述步骤c中的高渗溶液采用12.5mM葡萄糖，250mM NaCl，12.5mM NaH₂PO₄·2H₂O，12.5mM丙酮酸钠，12.5mM肌酐，0.63mM腺嘌呤，550mOsm/Kg，pH 8。

8.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中生物素化葡萄糖氧化酶制备过程为：将10mg生物素溶解于1mL二甲基甲酰胺中，然后加入5mL浓度为10mg/mL的葡萄糖氧化酶溶液及N，N'-羰基二咪唑，室温条件下搅拌1小时；然后，将溶液放到14kDa透析袋中，常温透析24小时；检测葡萄糖氧化酶浓度，并调整至4mg/mL。

9.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中生物素化的葡萄糖氧化酶修饰的具体步骤为：将步骤(2)处理后的生物素化葡萄糖氧化酶与经过步骤(1)预处理后的载药红细胞混合均匀，4℃，2小时；生物素化葡萄糖氧化酶与载药红细胞混合比例为0.5mg/10¹⁰cells。

10.权利要求1至3任一所述恩度体内控释药物在制备治疗肿瘤药物方面的应用。