[发明专利]一种磷酸化肽段富集装置及其富集方法

权利要求书

1.一种磷酸化肽段的 富集方法，其特征在于，应用磷酸化肽段富集装置，所述磷酸化肽段富集装置，包括可拆卸组合的分离柱及收集管；

所述分离柱，包括两端开口的套管，所述套管由上至下具加样部、反相色谱填料部和滤液排出部；所述反相色谱填料部有用于固相萃取的反相色谱填料；

所述收集管，为与离心机配合的容器，其上端开口与所述分离柱配合，侧方具有开孔，用于平衡内外气压；

工作时，所述分离柱通过所述收集管的上端开口与其可拆卸的固定，所述分离柱的下端开口处于所述收集管中央；含有磷酸化肽段的样品与具有磷酸化肽段亲和性的固体颗粒的混合物、清洗液、或洗脱液，经所述分离柱的上端开口加入到加样部，在500-2000 g离心过程中经反相色谱填料部固液分离后，滤液由滤液排出部下端开口进入到收集管内被收集；

包括以下富集、清洗、和/或洗脱步骤：

所述富集步骤具体为：将含有磷酸化肽段的样品与具有磷酸化肽段亲和性的固体颗粒的混合物震荡孵育后加入到所述的磷酸化肽段富集装置的分离柱加样部，并将所述装置置于离心机中离心，利用离心力使得所述混合物固液分离，其滤液被收集管收集；

所述清洗步骤具体为：将清洗液加入到盛装待清洗的吸附有磷酸化肽段的固体颗粒的磷酸化肽段富集装置的分离柱加样部，并将所述装置置于离心机中离心，利用离心力使得所述清洗液流经所述吸附有磷酸化肽段的固体颗粒，形成废液被收集管收集；

所述洗脱步骤具体为：将洗脱液加入到盛装清洗后的吸附有磷酸化肽段的固体颗粒的磷酸化肽段富集装置的分离柱加样部，并将所述装置置于离心机中离心，利用离心力使得所述洗脱液流经所述吸附有磷酸化肽段的固体颗粒并洗脱所述磷酸化肽段，形成富集有磷酸化肽段的样品；

所述具有磷酸化肽段亲和性的固体颗粒为氮三乙酸根合铁络合物微珠。

2.如权利要求1所述的磷酸化肽段的富集方法，其特征在于，所述反相色谱填料部处于所述分离柱出口3 mm至8 mm处。

3.如权利要求1所述的磷酸化肽段的富集方法，其特征在于，所述反相色谱填料为反相色谱填料C4、C8或C18。

4.如权利要求3所述的磷酸化肽段的富集方法，其特征在于，所述反相色谱填料为反相色谱填料C18。

5.如权利要求1所述的磷酸化肽段的富集方法，其特征在于，所述加样部与所述反相色谱填料部的容积比在20:1-100:1之间。

6.如权利要求1所述的磷酸化肽段的富集方法，其特征在于，所述分离柱套管滤液排出部具有缢缩。

7.如权利要求1所述的磷酸化肽段的富集方法，其特征在于，所述富集、清洗、以及洗脱步骤多次重复进行，当需要收集或弃去滤液时，更换收集管。

8.如权利要求1所述的磷酸化肽段的富集方法，其特征在于，所述富集步骤：500-2000g离心1-5分钟。

9.如权利要求1所述的磷酸化肽段的富集方法，其特征在于，所述清洗步骤：500-2000g离心1-5分钟；

清洗液为：第一清洗液、第二清洗液、或纯水；所述第一清洗液含有0.1 M NaCl、5-30%乙腈、以及0.1%有机酸；所述第二清洗液，含有50-80%乙腈、以及0.5-2%有机酸。

10.如权利要求9所述的磷酸化肽段的富集方法，其特征在于，所述第一清洗液含有0.1M NaCl、25%乙腈、以及0.1%有机酸。

11.如权利要求9所述的磷酸化肽段的富集方法，其特征在于，所述第二清洗液含有60%乙腈、以及1%有机酸；所述有机酸为乙酸、甲酸或三氟乙酸。