[发明专利]一种用于检测多种人乳头状瘤病毒分型的试剂盒及操作方法

说明书

本发明涉及一种用于检测多种人乳头状瘤病毒分型的试剂盒及操作方法。该试剂盒包括：分别容纳变性试剂、多种HPV分型特异性探针的混合物、检测试剂、底物试剂、阴性对照品和阳性对照品的试剂瓶、捕获板和洗涤液，其中所述多种HPV分型包括选自HPV16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73和82中的一种或多种。本发明还涉及该试剂盒的操作方法。利用本发明所述的试剂盒，能够快速、全面、准确地对18种HPV人乳头状瘤病毒分型进行检测。另外，在本发明的操作方法中，无需将变性后的样本进行纯化处理，步骤减少，缩短了检测时杂交步骤所需时间，提高了操作的效率。

技术领域

本发明涉及病毒核酸检测领域，更具体而言，其涉及一种用于检测多种人乳头状瘤病毒(HPV)分型的试剂盒及操作方法。

背景技术

宫颈癌是全球女性第二大恶性肿瘤。据世界卫生组织(WHO)统计，全世界每年约有50多万宫颈癌新发病例，约27万妇女死于宫颈癌，其中85％以上发生在缺乏有效宫颈癌筛查及治疗规划的低收入和中等收入国家。目前世界已公认，高危型人乳头状瘤病毒(HPV)感染是引发宫颈癌变的首要因素，这使得高危型HPV检测可作为宫颈疾病辅助诊断及处理后定性监测的主要手段之一。

Qiagen公司(收购digene公司)的产品HC2于2009年通过了美国FDA的认证，其能一次性检测13种高危型HPV，具体包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59和68型。其检测原理及反应条件为：样本中的HPV双链DNA在65℃条件下45分钟变性分解成单链，单链DNA与13种RNA探针混合物在65℃条件下60分钟结合为DNA-RNA杂合体，DNA-RNA杂合体与捕获微孔板上的抗DNA-RNA杂合体的特异性抗体在20-25℃条件下1100rpm的速度振荡60分钟结合固定在捕获微孔板上，再与偶联有碱性磷酸酶的抗DNA-RNA杂合体的特异性抗体在20-25℃条件下反应30-45分钟结合，洗板后加入碱性磷酸酶底物20-25℃条件下反应15-30分钟酶促发光，在化学发光免疫分析仪上测量出来并用相对光单位(RLU)表示来确定碱性磷酸酶的含量，从而确定DNA-RNA杂合体含量，最终判定样本中的HPV DNA含量。

然而，在这些检测技术中，操作步骤较多，容易导致检测所花费的时间较长，难以快速定量判断样本中的所携带的细菌或者病毒的DNA含量，且其他检测HPV的方法主要以PCR技术为主，其检测过程中涉及到靶标DNA的扩增，容易导致靶标DNA量受到影响，最终导致检测结果不够准确。另外，这些目前公知的技术不能高效且准确地检测其中的一些分型，例如HPV16或HPV18。因此，本领域中仍然需要一种能够快速且准确定量检测出靶标DNA的手段，尤其是一种能够快速、准确地检测多种人乳头状瘤病毒分型的手段。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明的目的在于提供一种能够检测多种(例如18种)人乳头状瘤病毒分型的试剂盒及操作方法。利用该试剂盒，能够快速、全面、准确地检测18种人乳头状瘤病毒分型，从而为该病毒的检查和确认提供有力的支持。

上述目的通过以下方案来实现：

在第一方面，提供了一种用于检测多种人乳头状瘤病毒分型的试剂盒，其包括：分别容纳变性试剂、多种HPV分型特异性探针的混合物、检测试剂、底物试剂、阴性对照品和阳性对照品的试剂瓶、捕获板和洗涤液，其中所述多种HPV分型包括选自HPV16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73和82中的一种或多种。

利用该试剂盒，能够一次性检测样本中是否携带多种HPV分型中的一种或多种，具有检测全面、快速、准确的优点。

进一步地，根据前述第一方面所述的试剂盒，所述变性试剂为氢氧化钠溶液。