[发明专利]包含白芨提取物的牙膏止血性能体外评价模型和方法

说明书

本发明公开了包含白芨提取物的牙膏止血性能体外评价模型和方法，其评价指标包括血小板聚集率、环磷酸腺苷(cAMP)和血栓素B₂(TXB₂)含量中至少一种；采集动物动脉血，离心，调整血浆浓度，检测其空白时的吸光度OD₀；将包含不同浓度白芨提取物的牙膏样品和对照样品分别加入到装有血浆的孔板内，轻微震荡，37℃恒温孵育充分反应，加入二磷酸腺苷溶液诱导血小板聚集反应；待上述反应体系内浊度发生变化时，测试血浆吸光度OD_t、cAMP和TXB₂的含量并计算血小板聚集率，用于评估牙膏止血性能。本发明不仅有效地减少和避免实验动物的使用，还可以大大提高牙膏配方研究工作效率，降低体内试验成本。

技术领域

本发明涉及口腔护理产品性能测试技术领域，涉及评价包含白芨提取物的牙膏止血性能，特别涉及构建一种包含白芨提取物的牙膏止血性能体外评价模型，用于评价该牙膏的止血性能。

背景技术

如今人们的口腔问题如龋齿、口臭、牙龈炎、牙周炎和牙敏感等越来越突出，对口腔护理产品的品质和功能要求也越来越高。但是，验证口腔护理原料及产品的抗炎和修复功能等仍是行业难点，传统的测试方法是通过动物实验进行验证。2009年3月，欧盟化妆品法规(EC)1223/2009正式实施，要求禁止对化妆品成分进行动物实验，并且禁止对成品或者成分进行过局部/急性动物实验的化妆品销售。显然，对化妆品原料和成品禁止动物实验将是未来趋势。随着口腔护理产品被纳入化妆品管理，如何能更加便捷且有效地筛选原料以及验证产品功效成为业内关注的焦点。

白芨(Blettila striata)，其药用价值从古至今均有明确记载，用于体内外出血症、烧烫伤、抗补体活性、治疗肿瘤等，我国白芨的种植面积位居世界首位，其中许多成分都具有较高药用价值和营养价值，如联苄类和菲类等由于其广泛的医学用途而备受关注，白芨胶粉和白芨葡甘聚糖胶作为医药原料、药用辅料和生物医学材料安全高效且性能好。血小板是一种膜结构的血液成分，在血液中发挥作用，主要是靠多种表面受体及存在于血小板中的可溶性介质来进行。在正常的血液循环过程中，血小板处于稳定的静止状态，当血管壁出现损伤时，通过表面接触和某些凝血因子的作用，血小板转入激活状态，出现凝集现象。白芨可通过增强血小板TXA₂的活性进而增加TXB₂含量，缩短凝血酶原时间，抑制纤维蛋白酶活性从而降低血浆中cAMP含量，使血细胞凝集形成人工血栓达到止血效果。但是，现有技术中仅简述白芨牙膏具有预防口腔出血效果，对其含量没有做过具体比较分析，且对其止血方面的研究较浅显，仅在凝血时间、凝血酶原等方面做局部研究。

发明内容

本发明基于药物研发前期先导化合物筛选的体外细胞实验，立足于白芨提取物的筛选以及其口腔护理产品的功效测试，构建一种包含白芨提取物的牙膏止血性能体外评价模型替代动物实验，用于口腔护理产品原料筛选或产品功效验证，特别用于评价该牙膏的止血性能。

本发明还通过上述体外评价模型可量化评价内含白芨提取物的牙膏止血效果。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

包含白芨提取物的牙膏止血性能体外评价模型，其评价指标包括血小板聚集率、环磷酸腺苷(cAMP)和血栓素B₂(TXB₂)中至少一种；

所述体外评价模型的构建方法包含以下步骤：

(ⅰ)采集动物动脉血，离心，提取血小板密度为1×10¹²/L的血浆置于96孔板内，检测其空白时的吸光度OD₀；

(ⅱ)将包含不同浓度白芨提取物的牙膏样品和对照样品分别加入到步骤(ⅰ)的孔板内，轻微震荡，于37℃恒温孵育至充分反应；和

(ⅲ)加入5uL的10uM二磷酸腺苷(ADP)溶液，轻微震荡，诱导血小板聚集反应；