[发明专利]一种用于牙髓干细胞向成骨细胞诱导分化的培养基及其制备方法以及应用

说明书

本发明提供了一种用于牙髓干细胞向成骨细胞诱导分化的培养基，包括：4～5.5g/L BSA、1.5mg/L还原型谷胱甘肽、0.08～0.12mmol/L β‑巯基乙醇、0.08％～1.5％(V/V)SITE、0.8～1.2M/L β‑甘油磷酸、15～25μM/L L‑抗坏血酸、0.5～1.2mM/L地塞米松、余量为添加了氨基酸浓缩液的低糖型DMEM培养基。本发明提供的用于牙髓干细胞向成骨细胞诱导分化的培养基为无血清培养基，该培养基可以优化牙髓干细胞向成骨细胞诱导分化的方法，诱导时间短，成本低。为骨组织工程的种子细胞的培养提供新的选择。

技术领域

本发明属于干细胞技术领域，具体涉及一种用于牙髓干细胞向成骨细胞诱导分化的培养基及其制备方法以及应用。

背景技术

牙髓干细胞(Dental Pulp Stem Cells，DPSC)是指存在于成年机体牙髓组织中具有自我更新和多向分化潜能的未分化细胞或称为前体细胞，同其他组织成体干细胞具有相似的生物学特性,并具有多向分化潜能、来源广泛、安全和免疫排斥反应小等特点。有实验证实DPSC具有多向分化潜能，DPSCs表达I型胶原、骨连接素、骨桥素、骨钙素、I型胶原等骨源性蛋白。

而人骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMMSCs)已被证实具有良好的成骨细胞分化潜能和成骨活性，是可用做开展组织工程骨的种子细胞，但是由于BMMSCs具有获得困难、创伤大、费用昂贵、患者接受程度低等缺点，使其在骨组织工程的临床应用中难以实现突破。而牙髓干细胞可在体外诱导向骨组织分化，同时牙髓干细胞比骨髓干细胞具有更高的克隆形成能力和增值速度，为该工程提供了实现突破的重要条件。

目前诱导牙髓干细胞骨向分化的方法非常的多，学者们使用成骨诱导分化液培养法、各种细胞因子及可溶性蛋白，如碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growthfactor，bFGF)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)、成骨细胞共培养法等方法诱导DPSC骨向分化，其中使用最广泛的是成骨诱导分化液培养法。添加了胎牛血清(Fetalbovine serum，FBS)的培养基被运用到细胞培养增值和诱导的各种实验中，是体外扩增充质干细胞最有效的培养基。但是，胎牛血清价格昂贵，且国外进口的胎牛血清很难购买。并且，含胎牛血清的诱导培养基诱导干细胞的分化时，相对无血清诱导分化培养基来说，诱导时间更长。因此由此产生的成本更高，人员投入的精力更多。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种用于牙髓干细胞向成骨细胞诱导分化的培养基及其制备方法以及应用，本发明提供的用于牙髓干细胞向成骨细胞诱导分化的培养基为无血清培养基，该培养基可以优化牙髓干细胞向成骨细胞诱导分化的方法，诱导时间短，成本低。

本发明提供了一种用于牙髓干细胞向成骨细胞诱导分化的培养基，包括：

4～5.5g/L BSA、1.5mg/L还原型谷胱甘肽、0.08～0.12mmol/L β-巯基乙醇、0.08％～1.5％(V/V)SITE、0.8～1.2M/L β-甘油磷酸、15～25μM/L L-抗坏血酸、0.5～1.2mM/L地塞米松、余量为添加了氨基酸浓缩液的低糖型DMEM培养基；所述SITE由等浓度的Sibiricoside-A溶液以及四氢叶酸溶液按体积比1:1的比例混合形成。

优选的，所述Sibiricoside-A溶液以及四氢叶酸溶液的体积浓度为0.16％～3.00％。

优选的，所述低糖型DMEM培养基中的葡萄糖浓度为1g/L。

优选的，所述氨基酸浓缩液为每升低糖DMEM培养基中加入1.0～2.0mL的MEM氨基酸溶液和0.3～0.8mL的MEM非必需氨基酸溶液。

本发明还提供了一种上述培养基的制备方法，包括以下步骤：