[发明专利]一种油茶籽油皂苷类化合物的分析方法

权利要求书

1.一种油茶籽油皂苷类化合物的分析方法，其特征在于：包括：

步骤1：在非加热条件下采用有机溶剂快速提取油茶籽油皂苷类化合物，提取液过滤膜，收集过滤液备用；所述步骤1中，油茶籽油皂苷类化合物提取的方法为：准确称取2.5g油茶籽油样品于离心管中，加入5mL正己烷，加入20-30mL乙醇水混合溶液，乙醇含量为65-85％，涡旋3-7min，3000-4000rmp离心8-12min后收集下层，旋蒸干燥后加入8-12mL蒸馏水溶解，将提取液移至离心管中，加入8-12mL正丁醇，涡旋振荡2-5min后离心分离，重复2-4次，合并正丁醇提取液旋蒸至干，用甲醇水重溶得到提取液；提取液过孔径为0.2-0.3μm的滤膜，收集过滤液备用；

步骤2：将步骤1获得的过滤液送入高效液相色谱仪和高分辨飞行时间质谱仪，其中：

色谱条件为：色谱柱：Agilent Poroshell 120EC-C18，规格为3.0mm×100mm,2.7μm，流动相A：0.1％甲酸水，流动相B：0.1％甲酸乙腈，梯度洗脱，流速：0.3mL/min，柱温：30℃，进样量：4μL；色谱条件中的％皆为体积分数；所述梯度洗脱具体为：0-2min,90％A,10％B；2-6min,90％A→65％A,10％B→35％B；6-16min,65％A→35％A,35％B→65％B；16-18min,35％A→5％A,65％B→95％B；18-19.9min,5％A,95％B；19.9-20min,5％A→90A,95％B→10％B；

质谱条件为：离子化模式：ESI^-，干燥气温度300℃，干燥器流速7±2L/min，毛细管电压3.5±0.5kV，雾化器压力35±5psig，鞘气温度350±10℃，鞘气流速10±2L/min，碎裂电压120±10V，一级质谱碰撞电压45±5V，二级质谱碰撞电压65±5V，离子扫描范围m/z＝100-1500；

步骤3：采用UHPLC-Q-TOF/MS对采集的数据进行分析，包括：收集现有技术中油茶籽中茶皂苷化合物的名称及分子式，并精确计算相对分子质量，利用MassHunter PCDL Manager软件建立含有茶皂苷化合物数据库；通过MassHunter定性软件结合皂苷类化合物数据库检索采集到的原始数据，得到提取液中含有的与茶皂苷化合物库中精确相对分子质量一致的色谱峰；利用Q-TOF/MS质谱分析器的四极杆选择色谱峰对应的分子离子，在碰撞池中对其进行碰撞诱导解离，裂解所得的碎片离子通过TOF扫描得到二级质谱图；根据离子的裂解情况推断油茶籽油皂苷类化合物提取液中含有的茶皂苷种类及结构。

2.根据权利要求1所述油茶籽油皂苷类化合物的分析方法，其特征在于：所述步骤1中，油茶籽油皂苷类化合物提取的方法为：准确称取2.5g油茶籽油样品于离心管中，加入5mL正己烷，加入20-30mL乙醇水混合溶液，其中乙醇含量为65-85％，涡旋5min，3500rmp离心10min后收集下层，旋蒸干燥后加入10mL蒸馏水溶解，将提取液移至离心管中，加入10mL正丁醇，涡旋振荡3min后离心分离，重复3次，合并正丁醇提取液旋蒸至干，用250μl 50％甲醇水重溶得到提取液，提取液过孔径为0.2-0.3μm的滤膜，收集过滤液备用；上述％皆为体积分数。

3.根据权利要求2所述油茶籽油皂苷类化合物的分析方法，其特征在于：所述步骤1中，油茶籽油皂苷类化合物提取的方法为：准确称取2.5g油茶籽油样品于离心管中，加入5mL正己烷，加入25mL乙醇水混合溶液，其中乙醇含量为85％，涡旋5min，3500rmp离心10min后收集下层，旋蒸干燥后加入10mL蒸馏水溶解，将提取液移至离心管中，加入10mL正丁醇，涡旋振荡3min后离心分离，重复3次，合并正丁醇提取液旋蒸至干，用250μl 50％甲醇水重溶得到提取液，提取液过孔径为0.22μm的滤膜，收集过滤液备用；上述％皆为体积分数。

4.根据权利要求1-3中任一项所述油茶籽油皂苷类化合物的分析方法，其特征在于：所述步骤2中质谱条件为：离子化模式：ESI-，干燥气温度300℃，干燥器流速7L/min，毛细管电压3.5kV，雾化器压力35psig，鞘气温度350℃，鞘气流速10L/min，碎裂电压120V，一级质谱碰撞电压45V，二级质谱碰撞电压65V，离子扫描范围m/z＝100-1500。