[发明专利]一种用于检测猫杯状病毒和猫细小病毒的组合物、试剂盒及其应用

说明书

本发明涉及一种用于检测猫杯状病毒和猫细小病毒的组合物，其包括分别用于检测猫杯状病毒和猫细小病毒的引物和探针；其中，所述引物包括如SEQ IDNO.1～SEQ ID NO.4所示的序列，所述探针包括如SEQ ID NO.5～SEQ ID NO.6所示的序列。本发明还涉及包括上述组合物的试剂盒及其应用。本发明所述的试剂盒在闭管状态下进行扩增反应及产物检测，避免了扩增产物污染而致的假阳性；探针杂交特异性更强、敏感性更高；且PCR后无需后续处理，操作更简单快速，安全无污染，可同时实现FCV和FPV两种病毒的检测。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，尤其涉及一种用于检测猫杯状病毒(FCV)和猫细小病毒(FPV)的组合物、试剂盒及其应用。

背景技术

猫杯状病毒(Feline calicivirus，FCV)属于杯状病毒科(Calicivirdae)水疮性病毒属(Vesivirus)成员，为大部分猫科动物的高致病性的病原体。在猫科动物中广泛的流行，且呈世界性分布，FCV主要感染猫，能够引起典型的呼吸道症状和口腔溃疡，此外还可以感染包括狮子、老虎、猎豹等在内的猫科野生动物，对猫以及珍稀野生动物的健康造成了很大的烕胁。近年来在中国、美国、英国和意大利等国家相继暴发了由FCV感染引起猫的恶性系统性疾病(FCV-associateedvirulent systemic disease)，该毒株被称为FCV-VSD株，可感染成年猫并导致高热、水肿、头部和四肢溃疡及黄疸等症状，并且呈现较高的死亡率。为了避免可能造成的严重后果，建立一种方便、快捷、灵敏的荧光定量PCR检测方法，用于感染动物的FCV检测尤为重要，也为有效控制该病的传播提供了有力的技术支持。

猫细小病毒病，又称猫瘟或猫泛白细胞减少症、猫传染性肠炎，是猫的一种急性高度接触性传染病，是危害猫科动物的主要疾病之一。现今在世界各地均有发生和分布。上世纪50年代初，我国有此病的记载，1984年首次分离到毒株FNF8，此后陆续有猫瘟病毒的分离的研究报道。猫细小病毒(Feline parvovirus，FPV)在自然条件下引起猫科、浣熊科和鼬科等多种动物发病，例如狮、虎、豹、猫、猞猁、水貂、浣熊、小鼠。未免疫或免疫失败的猫最易感猫瘟，尤以3-5月龄的幼猫最多。1岁以下的幼猫较易感染，感染率可达70％，死亡率为50％～60％，最高可达90％，随着年龄的增长发病率逐渐降低。临床表现多以突然发高热、顽固性呕吐、腹泻、严重脱水及白细胞急剧减少为主要特征。为及时发现，实现快速诊断，建立一种方便、快捷、灵敏的荧光定量PCR检测方法，用于感染动物的FPV检测尤为重要，也为有效控制该病的传播提供了有力的技术支持。

鉴于FCV和FPV所引起的疾病为临床上猫的常见、多发疾病，且FPV引起的疾病有较高的致死率，建立快速、准确的检测FCV和FPV的方法是有效诊断和防控猫科动物感染FCV和FPV的基础。

发明内容

为了克服现有技术中所存在的对FCV的检测采用单通道荧光RT-PCR方法或者荧光RT-PCR所具有的敏感性低、反应时间长以及或者没有检测FPV荧光RT-PCR方法等缺陷，本发明提供一种检测猫杯状病毒(FCV)和猫细小病毒(FPV)的组合物、试剂盒及其应用，其在闭管状态下进行扩增产物检测，避免了扩增产物污染而致的假阳性；探针杂交特异性更强；可同时实现FCV和FPV两种病毒的检测，大大缩短了检测时间，降低了检测成本；PCR后无需后续处理，操作更简单快速，安全无污染。因此，本发明所述的检测方法特异性强、敏感性高、快速、安全，对样品中含微量FCV和FPV基因组的检测效果良好，可用于FCV和FPV的实验室检测和分子流行病学调查。

当进行双通道PCR扩增时，其通常含有两对以上的引物以及两个以上不同的探针，而本领域技术人员均知同时使用的多个引物其在设计过程中需要兼顾不同引物的Tm值以及各个引物的特异性问题，还需要尽量避免多个引物的混合容易出现的引物之间形成二聚体的情况；不同探针的设计以及同时使用也存在类似的问题。而本发明通过严谨的设计及筛选，得到了特异性高、敏感性好且两对引物和与之同时使用的两个探针，为后续猫科动物病毒性疾病检测的发展提供了支点。