[发明专利]高致病性H7N9禽流感病毒的检测方法及其引物和探针

说明书

本发明属于分子生物学检测领域，公开了一种检测高致病性H7N9禽流感病毒的引物和探针，所述引物序列为：F‑引物：5’‑AATGTTCCTGAGGT TCCAAAGGGAAAACGGACTGC‑3’，R‑引物：5’‑GAGTGCTTTTGTAATCTGCAGCAGTTCCCTCTCCC‑3’；所述探针的序列为：5’‑CGGGTTTCATTGAAAAT GGATGGGAAGGCCTATTGATGGTTGGTATGGT‑3’。本发明所述检测方法的特异性强、灵敏度高、重复性好，还具有简便、快速的特点。

技术领域

本发明属于分子生物学检测领域，具体涉及高致病性H7N9禽流感病毒的检测方法及其引物和探针。

背景技术

禽流感是由A型禽流感病毒(Avian influenz virus,AIV)引起的禽类疾病。AIV根据基质蛋白HA和NA的抗原特性分为16种HA亚型(H1-H16)和9种NA亚型(N1-N9)，共有144种亚型。该病毒除可以感染禽类外，部分毒株也能够引起人感染发病。2013年3月以来，发生人感染禽流感并导致多人死亡的病例，经国家禽流感参考实验室证实，此次禽流感疫情由全球首次发现的H7N9新型流感病毒引起，能导致人类发生严重或致命的呼吸系统疾病。

疫情初期，H7N9亚型禽流感病毒对家禽是低致病性的，家禽的死亡率很低，有的甚至没有出现明显临床症状，也无死亡病例。但根据2017年2月19日中国疾控中心报道，从广东的两例人感染禽流感H7N9病例中分离病毒株的测序结果显示，该病毒已变异为高致病性禽流感病毒，造成禽类中出现病死等情况。农业部2017年3月24日发布了湖南省永州市东安县蛋鸡感染禽流感病毒的情况，这是我国第一起蛋鸡感染高致病性H7N9禽流感的疫情。

因此，建立一种快速检测方法对于控制新发高致病性H7N9亚型禽流感是非常重要的。

发明内容

本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种检测高致病性H7N9禽流感病毒的引物和探针，以及基于所述引物和探针的RAA(重组酶介导核酸扩增)检测方法。本发明所述检测方法的特异性强、灵敏度高、重复性好，还具有简便、快速的特点。

一种检测高致病性H7N9禽流感病毒的引物和探针，

所述引物的序列为：

F-引物：5’-AATGTTCCTGAGGTTCCAAAGGGAAAACGGACTGC-3’，

R-引物：5’-GAGTGCTTTTGTAATCTGCAGCAGTTCCCTCTCCC-3’；

所述探针的序列为：

5’-CGGGTTTCATTGAAAATGGATGGGAAGGCCTATTGATGGTTGGTATGGT-3’。

优选的，所述探针上标记有荧光基团、淬灭基团和THF，所述荧光基团与所述淬灭基团均标记在T碱基上，所述荧光基团与所述淬灭基团的间距为1～5nt；所述荧光基团与所述淬灭基团之间设有所述THF，所述THF距所述探针5’端≥30nt，所述THF距所述探针3’端≥15nt。

所述THF为四氢呋喃残基，所述THF的数量为一个。

本发明根据GenBank中公布的高致病性H7N9亚型禽流感病毒核酸HA基因的全序列与其它禽流感病毒HA基因的全序列进行比对，通过分析找到高致病性H7N9亚型禽流感病毒区别于其他禽流感病毒的特异性保守区域。

本发明针对该特异性保守区域设计特异性引物和探针，设计了多组不同的引物和探针组合，并经过筛选和分析，从而确定上述引物和探针的检测效果最佳。