[发明专利]一种联肼尼克酰胺聚乙二醇双环五肽的制备工艺

说明书

本发明提供一种联肼尼克酰胺聚乙二醇双环五肽的制备工艺，将该化合物直接拆分成两个片段，通过固相合成即可获得纯度较高的HYNIC‑PEG4‑Glu‑OH片段，活化该片段中谷氨酸上的两个羧基，制成活化酯，即可与保护的PEG4‑c[KR(Pbf)GDF]发生二聚，酸性切除Pbf保护基团，即可获得目标化合物，比原工艺更加简洁，避免了分别偶联Glu、PEG4、HYNIC带来的繁琐的操作及后处理，使得昂贵的PEG4‑c[KR(Pbf)GDF]得以充分利用。

技术领域

本发明涉及固相多肽合成领域，具体涉及一种联肼尼克酰胺聚乙二醇双环五肽的制 备工艺。

背景技术

RGD肽是一类含有精氨酸、甘氨酸、天冬氨酸(Arg-Gly-Asp)的短肽,作为整合素和其配体相互作用的识别位点,能与肿瘤细胞或者新生血管特异表达的某些整合素如 αvβ3结合。因此,这类受体可以作为肿瘤靶向治疗的靶点,利用外源RGD肽竞争结合整 合素受体可以靶向标记定位肿瘤，达到更有效、精确和安全治疗的目的。目前已开发出 一种新型的由精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-D-苯丙氨酸-赖氨酸五个氨基酸组成的环形五肽 结构的二聚体，在二聚体间引入了甘氨酸、聚乙二醇(PEG)结构增加药物的水溶性， 改善了该化合物整体代谢动力学，同时也扩大了二聚体间距，能够更有效地结合整合素 αvβ3。具体的该化合物的结构为双[四聚乙二醇酰-环(L-精氨酰-甘氨酰-L-天冬氨酰-D- 苯丙氨酰-L-赖氨酰)]-L-谷氨酰-[(E)-2-((2-(5-四聚乙二醇酰吡啶-2-基)亚肼基)甲基)苯磺 酸钠]，简称：联肼尼克酰胺聚乙二醇双环五肽。

该项目执行过程中所建立的方法和理论，以及所搭建的放射性药物制备及评价平台，放射性同位素示踪技术及分子影像技术平台已在“重大新药创制”重大专项其他两 个课题(2009ZX09301-010，2009ZX09103-746)，国家“973”项目(2011CB707703)，以 及国家自然科学基金重点项目(30930030)中发挥了重要作用，目前已申请发明专利3项， 其中1项已被授权，具体如下：

1)一种RGD多肽放射性药物及其制备方法，专利号：ZL200810239036X

2)用于integrinαvβ3阳性肿瘤的RGD多肽放射性药物及其制备方法，专利申请号：200910077039.2

3)放射性核素标记的RGD多肽药物及其制备方法，专利申请号：200910077728.3

在上述专利中首先合成步骤较长，专利中描述的具体步骤为：先将Glu(Boc)与HOSu 在DIC存在将Glu(Boc)的两个羧基活化，制成Glu(Boc)(OSu)₂再与PEG₄-c(KRGDF)发生二聚反应，获得Glu(Boc)[PEG₄-c(KRGDF)]₂；同样的方法将Fmoc-PEG₄-OH的羧基 用HOSu、DIC活化，制成Fmoc-PEG₄-OSu，再与脱去Boc的Glu[PEG₄-c(KRGDF)]₂偶 联，获得Fmoc-PGE-Glu[PEG₄-c(KRGDF)]₂；Fmoc-PGE₄-Glu[PEG₄-c(KRGDF)]₂脱去Fmoc基团与HYNIC-NHS偶联得到终产品HYNIC-PGE₄-Glu[PEG₄-c(KRGDF)]₂(联肼尼 克酰胺聚乙二醇双环五肽)。其次所用PEG₄-c(KRGDF)中精氨酸胍基上裸露的氨基没有 保护，胍基碱性较强，可以与后面的活化酯反应引起一系列的副反应。

发明内容

本发明的目的在于针对以上技术问题，提供一种合成路线简单、生产成本低、高收率、高纯度的联肼尼克酰胺聚乙二醇双环五肽的制备工艺