[发明专利]一种燕子花丛生芽途径的植株再生体系建立方法

说明书

本发明提供一种燕子花丛生芽途径的植株再生体系建立方法，包括以下步骤：(1)种子消毒：成熟的燕子花种子用酒精及NaClO溶液消毒；(2)外植体获取：消毒后种子在无菌水中萌发，以种子萌发后具2‑3片初生叶的幼苗去除根后的基部生长点作为外植体；(3)丛生芽诱导及增殖培养：将外植体接种在丛生芽诱导增殖培养基中，每隔30d更换一次培养基；(4)组培苗生根培养：丛生芽长至5‑10cm时，将其分割修剪，接种于生根培养基中；(5)炼苗移栽：生根后植株室内炼苗3d，水培20d后移植到装有栽培基质(园土：蛭石＝3：1)的花盆中。本方法实现了燕子花的组培快繁，促进资源开发利用，可有效保护燕子花种质资源。

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域，特别涉及燕子花丛生芽途径的植株再生体系建立方法。

背景技术

燕子花(Iris laevigata)又名平叶鸢尾、光叶鸢尾，为鸢尾科鸢尾属多年生草本植物，多分布于中国黑龙江、吉林、辽宁及云南，也产于日本、朝鲜及俄罗斯，适宜生长在沼泽地、河岸边的水湿地。燕子花在世界各地植物园都有引种应用，是著名的观赏花卉。其花色艳丽、花姿优雅、叶型挺拔，观赏价值较高，群体功能较强，栽培历史悠久，具有优秀的耐寒能力，能适应多种生境，是装饰环境的优良材料，园林应用形式多样。总之，燕子花在园林领域具有极大的应用潜力，可以产生良好的经济效益、环境效益、生态效益和社会效益。

在自然条件中，包括燕子花在内的鸢尾属植物繁殖途径以种子繁殖和分株繁殖为主(姬长平，2016)。其种子繁殖萌发率低，繁殖缓慢，对燕子花的大范围应用限制明显；分株繁殖存在繁殖系数低，分株后植物生长速度不齐等问题(卢明艳等，2017)。综上所述，目前常见的两种传统繁殖方法均不能满足燕子花科研育种、推广应用的需要。

植物组织培养技术旨在利用植物细胞全能性，在适当的条件下，通过少量植物组织增殖分化成完整植株(姬昌平，2016)。为了促进燕子花在园林领域的推广应用，同时也为了保护在野生状态中日益减少的燕子花资源，开发高效便捷的燕子花组织培养扩繁途径，建立燕子花植株再生体系是十分必要且迫切的。目前，燕子花丛生芽途径植株再生体系的研究报道较少，赵宏波等人利用燕子花未成熟果实进行离体快速繁殖的研究，其研究通过燕子花组织培养，培养出燕子花无性系植株，但其植物材料燕子花未成熟果实的采集时间需在6月上旬到中旬，否则诱导率会大大下降，并且其研究未量化指出燕子花不定芽生根率及生根系数等生根情况(赵宏波等，2015)。

目前燕子花传统繁殖技术存在种子萌发率低，繁殖缓慢，分株繁殖系数低等缺点；已知的燕子花植株再生体系受季节限制明显，再生体系中未见明确的不定芽生根率和生根系数报道，燕子花植株再生体系建立方法还有待完善。

发明内容

本发明的目的在于提供一种繁殖系数高、不受季节限制的燕子花丛生芽途径的植株再生体系建立方法，为燕子花的全年快繁奠定基础，提高燕子花的繁殖速度，进而促进燕子花资源开发利用，同时保护燕子花种质资源。

本发明所采取的技术方案，包括以下步骤：

(1)种子消毒：沙藏后种子去除外种皮，用稀释的洗洁精及流水清洗后，用酒精及NaClO溶液消毒并用无菌水冲洗；

(2)外植体获取：成熟的燕子花种子置入无菌水中培养萌发，选择种子萌发产生的幼苗修剪后去除根，保留基部生长点，作为丛生芽诱导的外植体；

(3)丛生芽诱导及增殖培养：将外植体在无菌条件下，接种在丛生芽诱导增殖培养基中培养，每隔30d更换一次培养基；

(4)组培苗生根培养：丛生芽长至5-10cm时，选择生长良好的丛生芽，以4个不定芽为单位，将其分割修剪，叶片修剪至2-3cm，在无菌条件下接种在生根培养基中培养；