[发明专利]鼻咽癌相关基因DACT1、NFAT1、SHISA3甲基化检测试剂盒有效
| 申请号： | 201911101925.4 | 申请日： | 2019-11-12 |
| 公开（公告）号： | CN110643709B | 公开（公告）日： | 2022-11-22 |
| 发明（设计）人： | 许嘉森;吴诗扬;彭璨璨;刘志明;刘芳 | 申请（专利权）人： | 益善生物技术股份有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6886 | 分类号： | C12Q1/6886;C12Q1/686 |
| 代理公司： | 广州广典知识产权代理事务所(普通合伙) 44365 | 代理人： | 万志香 |
| 地址： | 510663 广东省广州市*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 鼻咽癌 相关 基因 dact1 nfat1 shisa3 甲基化 检测 试剂盒 | ||
1.鼻咽癌相关基因DACT1、NFAT1、SHISA3甲基化检测试剂盒，其特征在于，包括碱性溶液、荧光PCR反应液，所述碱性溶液和所述荧光PCR反应液被热熔材料分层包装在同一PCR扩增管内；所述碱性溶液为pH值为12.5～13.3、浓度为50～100mmol/L的NaOH溶液，其体积不超过PCR反应液体积的50%；所述荧光PCR反应液包含PCR缓冲液，dNTP，针对DACT1、NFAT1、SHISA3基因的引物及探针，DNA聚合酶，无核酸酶的水和UDG酶；所述引物及探针包含：针对DACT1基因的SEQ ID NO. 1至 SEQ ID NO. 2所示的引物和SEQ ID NO. 3所示的探针、针对NFAT1基因的SEQ ID NO. 4至 SEQ ID NO. 5所示的引物和SEQ ID NO. 6所示的探针、和针对SHISA3基因的SEQ ID NO. 7至 SEQ ID NO. 8所示的引物和SEQ ID NO. 9所示的探针；所述引物的3’端最外侧的3个碱基中的倒数第3个碱基具有LNA修饰；所述的热熔材料为石蜡；
所述荧光PCR反应液还包括内参基因的如SEQ ID .10至SEQ ID.11所示的引物及和SEQID.12所示的探针；
所述荧光PCR反应液还包括blocker引物，所述blocker引物为针对DACT1基因的SEQ IDNO. 13、针对NFAT1基因的SEQ ID NO. 14、针对SHISA3基因的SEQ ID NO.15、和针对内参基因的SEQ ID NO. 16。
2.根据权利要求1所述的鼻咽癌相关基因DACT1、NFAT1、SHISA3甲基化检测试剂盒，其特征在于，所述碱性溶液为pH值为12.5～12.8、浓度为70～80mmol/L的NaOH溶液，其体积不超过PCR反应液体积的50%。
3.根据权利要求1所述的鼻咽癌相关基因DACT1、NFAT1、SHISA3甲基化检测试剂盒，其特征在于，所述荧光探针经修饰其5’端带有荧光报告基团，3’端带有荧光淬灭基团。
4.根据权利要求3所述的鼻咽癌相关基因DACT1、NFAT1、SHISA3甲基化检测试剂盒，其特征在于，所述荧光报告基团包括FAM、HEX、ROX或CY5；所述荧光淬灭基团为BHQ。
5.根据权利要求1-4任一项所述的鼻咽癌相关基因DACT1、NFAT1、SHISA3甲基化检测试剂盒，其特征在于，所述UDG酶浓度为5U/µl，用量为2±0.1µl。
6.根据权利要求1-4任一项所述的鼻咽癌相关基因DACT1、NFAT1、SHISA3甲基化检测试剂盒，其特征在于，还包括阴性质控品和阳性质控品。
7.根据权利要求6所述的鼻咽癌相关基因DACT1、NFAT1、SHISA3甲基化检测试剂盒，其特征在于，所述阴性质控品由经亚硫酸氢盐转化但未经脱硫处理的非甲基化人类基因组DNA组成；
所述阳性质控品由经亚硫酸氢盐转化但未经脱硫处理的非甲基化人类基因组DNA和经亚硫酸氢盐转化但未经脱硫处理的甲基化人类基因组DNA组成。
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