[发明专利]一种促进TFEB核转位的短肽及基于其的线性短肽和其减轻脑缺血损伤的应用

说明书

本发明公开了一种促进TFEB核转位的短肽及基于其的线性短肽和其减轻脑缺血损伤的应用，属于生物医药技术领域。本发明公开的短肽是一种由TFEB蛋白与14‑3‑3蛋白结合的功能区域融合而成的短肽，其核苷酸序列如SEQ.ID.NO.1所示。本发明还公开了保护上述短肽的线性短肽，由穿膜肽与上述短肽融合而成。本发明通过实验验证了合成的融合肽能够调控TFEB核转位，促进CMA减轻细胞损伤。因此，公开了其减轻神经元死亡以及改善脑缺血损伤的治疗新靶点的应用。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，涉及促进TFEB核转位增强分子伴侣介导的自噬(Chaperone-mediated autophagy，CMA)减轻神经损伤的短肽及其应用，具体涉及一种促进TFEB核转位的短肽及基于其的线性短肽及其减轻脑缺血损伤的应用。

背景技术

脑卒中严重威胁人类生命健康，全球每年约有1690万新发卒中患者，590万病人死于卒中相关性疾病；另有3300万卒中病人需要长期治疗、照顾，给社会和家庭带来了沉重的负担(Lancet，2017)。tPA(Tissue plasminogen activator)是目前美国FDA批准治疗缺血性卒中的唯一药物，但其治疗时间窗短、增加出血风险，仅有4-7％的患者从中受益。因此，进一步阐明卒中的病理机制，寻找可靠的药物靶点，对开发卒中的干预措施和治疗药物具有重要意义。

自噬(Autophagy)的发现，是人们认识细胞存活的一次飞跃，开创了机体维持内环境稳态、减少细胞死亡的新纪元，也为缺血性脑卒中的防治提供了新思路。大量研究证实，多种预处理方式及雷帕霉素可通过促进自噬减轻脑缺血损伤。申请者研究团队发现，高压氧(Hyperbaric oxygen,HBO)预处理可通过增强神经元自噬减轻脑缺血损伤；最新研究也证实，上调星形胶质细胞的自噬流水平，可减少脑缺血后神经。但迄今为止，自噬加重还是减轻脑缺血损伤仍存争议(Progress in Neurobiology，2018)；相关研究也指出用3-MA或Beclin-1 RNAi抑制自噬可减轻脑缺血后神经损伤。自噬究竟加重还是减轻脑缺血损伤，重新审视“自噬影响脑缺血损伤预后的核心机制”迫在眉睫。

在近期研究中，申请人课题组利用iTRAQ高通量蛋白质组学技术筛选出内源性脑保护作用的效应分子Cystatin C；并通过构建基因敲除大鼠验证，发现Cystatin C可通过保护自噬的最关键部分——溶酶体，从而减轻脑缺血损伤(ZP Fang et al.Stroke，2017)。在探索Cystatin C通过哪些途径及下游信号分子保护溶酶体的研究中，我们发现在Cystatin C基因敲除大鼠脑内，调控自噬-溶酶体通路的关键因子——TranscriptionFactor EB(TFEB)表达显著降低。同时，我们意外地发现TFEB降低情况下，溶酶体膜的重要成分、也是调节分子伴侣介导自噬(Chaperone-mediated autophagy，CMA)的关键蛋白——Lysosome-associated membrane protein 2A(LAMP-2A)显著减少。这一新发现促使我们思索自噬调节细胞存活的核心机制是什么。根据细胞内物质传送至溶酶体的具体方式，自噬可分为大自噬(Macroautophagy)、小自噬(Microautophagy)以及分子伴侣介导的自噬(CMA)。以往研究多集中于大自噬，3-MA或Beclin-1 RNAi等干预措施也只能调节大自噬。但大自噬降解底物无选择性——既可降解受损蛋白、细胞器；也可由于自噬过度，过多地降解细胞自身正常成分，造成细胞死亡。这可能是导致自噬影响脑缺血损伤预后出现争议性结果的重要原因。反观CMA，是一种具有靶向降解错误折叠蛋白的自噬类型。调控CMA是否才是减轻脑缺血损伤的关键，自噬-溶酶体通路的关键调节因子TFEB是否可以调控CMA减轻脑缺血损伤，经过检索发现，目前并没有这方面的任何研究报道。

发明内容

为了克服上述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种促进TFEB核转位的短肽及基于其的线性短肽和其减轻脑缺血损伤的应用。

为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案予以实现：