[发明专利]ASFV-P54蛋白重组方法及利用其制备的夹心ELISA试剂盒在审
| 申请号： | 201911080865.2 | 申请日： | 2019-11-07 |
| 公开（公告）号： | CN110684085A | 公开（公告）日： | 2020-01-14 |
| 发明（设计）人： | 张志;官丽娟;宫枫举;邵钰;韩同福;李翠翠;孙学强 | 申请（专利权）人： | 青岛立见诊断技术发展中心 |
| 主分类号： | C07K14/01 | 分类号： | C07K14/01;C12N15/34;G01N33/569 |
| 代理公司： | 11427 北京科家知识产权代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 彭友谊 |
| 地址： | 266114 山东省青岛市城阳区红岛经济区*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 检测 制备 夹心ELISA 底物溶液 扩增 抗体检测试剂盒 非洲猪瘟病毒 抗原包被板 病毒检测 蛋白重组 目的基因 时间缩短 血清样本 血清样品 阳性血清 阴性血清 引物序列 对引物 抗逆性 酶标记 试剂盒 洗涤液 终止液 抗原 截短 稀释 组份 蛋白 基因 | ||
1.ASFV-P54蛋白重组方法，其特征在于所述方法利用的PCR扩增引物，上游引物为：5'-CATATGATGGATTCTGAATTTTTTCA-3'；下游引物为：5'-AAGCTTTTACAAGGAGTTTTCTAGGT-3'，这对引物只能扩增p54基因截短的CDS区片段，扩增目的基因长度为552bp。
2.利用上述方法制备的ASFV-P54制备的非洲猪瘟病毒夹心ELISA抗体检测试剂盒，包括含有以下组份，ASFV P54抗原包被板、ASFV阳性血清、ASFV阴性血清、20×洗涤液、酶标记的P54抗原、底物溶液A、底物溶液B和终止液；
所述ASFV P54抗原包被板组份为：每孔包被0.1μg ASFV特异性P54抗原；
ASFV阳性血清为含有ASFV抗体的猪血清，ASFV阴性血清为不含有ASFV抗体的猪血清；
所述20×洗涤液组份为：终浓度为0.2M的磷酸盐缓冲液和质量比1％Tween-20，pH值为7.2；
所述酶标抗原组份为：辣根过氧化物酶标记的ASFV特异性抗原用去离子水稀释10000倍；
所述底物溶液A组份及终浓度为：0.045M Na2HPO4·12H2O、0.05M柠檬酸、0.0054M过氧化脲，pH值5.0-5.5；
所述底物溶液B组份及终浓度为：0.08M四甲基联苯胺和体积比1％无水乙醇；
所述终止液组份为体积比10％的硫酸水溶液。
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