[发明专利]带有荧光标记的PD-L1膜表面表达细胞模型及其应用在审
| 申请号： | 201911076907.5 | 申请日： | 2019-11-06 |
| 公开（公告）号： | CN110734895A | 公开（公告）日： | 2020-01-31 |
| 发明（设计）人： | 王选年;孙国鹏;何海汛;岳锋;李鹏;张艳芳;朱艳平;郭东光;陈威;李丹;蒋力维 | 申请（专利权）人： | 新乡学院 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/85;C12N15/65;C12N15/66;C07K7/08;C07K16/28;C12Q1/02 |
| 代理公司： | 11004 北京中建联合知识产权代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 旦帅男;王灵灵 |
| 地址： | 453003 河*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 真核宿主细胞 成熟蛋白 细胞模型 荧光表达 真核 细胞膜 信号肽序列 真核细胞膜 表达细胞 全长序列 瞬时表达 细胞表面 细胞形成 荧光标记 膜表面 信号肽 多肽 构建 抗体 锚定 转染 应用 展示 筛选 细胞 | ||
1.带有荧光标记的PD-L1膜表面表达细胞模型，其特征在于：所述细胞模型是可表达PD-L1成熟蛋白全长序列的真核宿主细胞，所述真核宿主细胞由构建完成的真核荧光表达载体转染至293T细胞形成，所述真核荧光表达载体在293T细胞中瞬时表达PD-L1蛋白，并将PD-L1蛋白展示在293T细胞表面。
2.如权利要求1所述的带有荧光标记的PD-L1膜表面表达细胞模型，其特征在于：所述真核荧光表达载体为pECFP-Fc-PD-L1重组载体，先由添加Kozak序列和酶切位点的牛Fc γ受体信号肽序列，插入到真核表达载体pECFP-N1的多克隆位点中形成pECFP-Fc重组载体，之后构建T-PD-L1重组载体，将pECFP-Fc重组载体和T-PD-L1重组载体进行酶切酶连形成pECFP-Fc-PD-L1重组载体。
3.如权利要求2所述的带有荧光标记的PD-L1膜表面表达细胞模型，其特征在于：所述PD-L1成熟蛋白全长序列位于牛Fc γ受体信号肽序列的下游，并与真核表达载体pECFP-N1中的EYFP蛋白融合表达。
4.如权利要求3所述的带有荧光标记的PD-L1膜表面表达细胞模型，其特征在于：所述PD-L1成熟蛋白全长序列是犬PD-L1成熟蛋白全长序列，其编码的DNA序列是如SEQ ID No:1所示序列。
5.如权利要求4所述的带有荧光标记的PD-L1膜表面表达细胞模型，其特征在于：所述pECFP-Fc-PD-L1重组载体完整DNA序列是如SEQ ID No:2所示序列。
6.如权利要求2所述的带有荧光标记的PD-L1膜表面表达细胞模型，其特征在于：所述牛Fc γ受体信号肽序列添加Kozak序列、酶切位点
7.如权利要求7所述的带有荧光标记的PD-L1膜表面表达细胞模型的应用方法，其特征在于：所述细胞模型在筛选能与PD-L1结合的生物大分子中的应用。
8.如权利要求7所述的带有荧光标记的PD-L1膜表面表达细胞模型的应用方法，其特征在于：所述细胞模型在筛选能与PD-L1结合的多肽中的应用，以该细胞模型为底物加入随机十二肽库，经过三轮淘洗并测序，得到能与PD-L1结合的多肽。
9.如权利要求7所述的带有荧光标记的PD-L1膜表面表达细胞模型的应用方法，其特征在于：所述细胞模型在筛选能与PD-L1结合的抗体中的应用，以该细胞模型为底物加入待筛选的抗体，再加入荧光标记的二抗显色，进行抗体的筛选。
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