[发明专利]组合利用琼胶酶制备新琼二糖的方法、重组宿主细胞及重组宿主细胞与表达载体的应用

权利要求书

1.一种组合利用琼胶酶制备新琼二糖的方法，其特征在于，该方法组合利用内切型琼胶酶AgaA和外切型双功能琼胶酶AgaB降解琼脂或琼脂糖或粗琼胶获得新琼二糖，内切型琼胶酶AgaA的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，外切型双功能琼胶酶AgaB的氨基酸序列如SEQID NO:2所示。

2.如权利要求1所述一种组合利用琼胶酶制备新琼二糖的方法，其特征在于，编码所述内切型琼胶酶AgaA的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

3.如权利要求1所述一种组合利用琼胶酶制备新琼二糖的方法，其特征在于，所述外切型双功能琼胶酶AgaB同时具有降解琼脂糖和紫菜多糖的活性。

4.如权利要求1所述一种组合利用琼胶酶制备新琼二糖的方法，其特征在于，编码所述外切型双功能琼胶酶AgaB的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

5.如权利要求1所述一种组合利用琼胶酶制备新琼二糖的方法，其特征在于，内切型琼胶酶AgaA和外切型双功能琼胶酶AgaB可以同时加入，或先加入内切型琼胶酶AgaA再加入外切型双功能琼胶酶AgaB，或先加入外切型双功能琼胶酶AgaB再加入内切型琼胶酶AgaA。

6.如权利要求1所述一种组合利用琼胶酶制备新琼二糖的方法，其特征在于，先加入内切型琼胶酶AgaA将琼脂或琼脂糖或粗琼胶液化，再加入外切型双功能琼胶酶AgaB进一步降解产生新琼二糖。

7.如权利要求1所述一种组合利用琼胶酶制备新琼二糖的方法，其特征在于，该方法中利用琼脂或琼脂糖或粗琼胶为底物，其中琼脂或琼脂糖浓度为1-20g/L，粗琼胶浓度为10-200g/L。

8.如权利要求1所述一种组合利用琼胶酶制备新琼二糖的方法，其特征在于，该方法中酶解温度为20-60℃，pH为5.0-9.0。

9.如权利要求1所述一种组合利用琼胶酶制备新琼二糖的方法，其特征在于，该方法能够将琼脂或琼脂糖充分水解，转化为新琼二糖，转化率为90-95%。

10.一种重组宿主细胞，其特征在于，所述重组宿主细胞共表达内切型琼胶酶AgaA和外切型双功能琼胶酶AgaB，所述内切型琼胶酶AgaA的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示、所述外切型双功能琼胶酶AgaB的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

11.如权利要求10所述的一种重组宿主细胞，其特征在于，所述重组宿主细胞为大肠杆菌、枯草芽孢杆菌或酵母中的任意一种。

12.如权利要求10所述的一种重组宿主细胞，其特征在于，所述重组宿主细胞至少包含一种表达载体，所述表达载体含有至少一个拷贝的如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列。

13.如权利要求10所述的重组宿主细胞在制备新琼二糖中的应用。