[发明专利]一种携带肿瘤-睾丸抗原10基因的重组腺相关病毒载体及其应用价值

说明书

本发明公开了一种携带肿瘤‑睾丸抗原10(Cancer‑testis antigen 10，CT10)基因的重组腺相关病毒(rAAV)载体，并证明了其应用价值。该rAAV载体是将CT10抗原基因插入本发明人构建的AAV出发载体从而构建成功的。本发明的研究证明rAAV的病毒载体可有效地将其携带的CT10抗原基因导入人单核细胞‑树突状细胞系中，用于刺激CT10抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的产生。实验证明，被本发明的rAAV感染的DC所诱导的CTL能够有效地裂解CT10抗原阳性的恶性肿瘤细胞。因此，本发明的携带CT10抗原基因的重组腺相关病毒载体或其相关产品具有实用价值，可被用于制备CT10抗原特异性CTL，裂解CT10抗原阳性的恶性肿瘤细胞，发挥抗肿瘤细胞免疫治疗的作用。

【技术领域】

本发明涉及生物领域中的载体及其应用，特别是涉及一种携带肿瘤-睾丸抗原10(Cancer-testis antigen 10，CT10)基因的重组腺相关病毒载体及其构建方法以及其在制备抗CT10抗原阳性的肿瘤的靶向性细胞免疫治疗的应用价值。

【背景技术】

腺相关病毒(adeno-associated virus，AAV)的基因结构已经被鉴定。1983年，Samulski等人描述了AAV的末端重复片段(上游5’端片段，下游3’端片段)(Samulski RJ,Srivastava A,Berns KI,Muzyczka N.Rescue of adeno-associated virus fromrecombinant plasmids:gene correction within the terminal repeats ofAAV.Cell.33:135-143.)。1984年，Hermonat等人描述了AAV的低感染颗粒(lip)基因和包膜(cap)基因(Hermonat PL,Labow MA,Wright R,Berns KI,Muzyczka N.Genetics ofadeno-associated virus:isolation and preliminary characterization of adeno-associated virus type 2 mutants.J Virol.51:329-339.Hermonat,P.L.,andMuzyczka,N.Use of adeno-associated virus as a mammalian DNA cloning vector:transduction of neomycin resistance into mammalian tissue culture cells.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.81:6466-6470.)。1986年，Labow等人鉴定了位于上游5’端片段和rep基因之间的p5启动子(Labow MA,Hermonat PL,Berns KI.Positive and negativeautoregulation of the adeno-associated virus type 2 genome.J Virol.160:251-258.)。

1984年，美国Paul L.Hermonat证明AAV载体可用于人类疾病的基因治疗。目前，主要是欧美国家在进行以AAV为基础的基因治疗人类疾病的临床试验。据美国粮食和药品管理局统计，现有十余项以AAV为基础的基因治疗临床试验正在进行，主要是将携带治疗基因的AAV病毒注入患者体内，使其在体内表达治疗基因，从而达到治疗疾病的目的。主要针对治疗的疾病是帕金森氏综合症、风湿性关节炎、血友病、心力衰竭、进行性肌萎缩和奥兹海默综合症等非肿瘤性疾病。2012年11月2日欧盟批准UniQure公司的Glybera产品在欧盟27个成员国使用，这是西方国家第一个获批准的基因治疗药物，它是利用腺相关病毒I型(AAV-I)携带外源基因用于治疗脂蛋白脂酶缺乏遗传病(LPLD)的基因药物。美国FDA批准的Spark Therapeutics公司开发的Luxturna，是通过腺相关病毒Ⅱ型(AAV-Ⅱ)携带外源基因来治疗RPE65突变引起的遗传性视网膜疾病。