[发明专利]一种葡萄糖氧化酶修饰的介孔二氧化锰药物组合物的制备方法及应用

权利要求书

1.一种葡萄糖氧化酶修饰的介孔二氧化锰药物组合物的制备方法，其特征在于，将葡萄糖氧化酶通过酰胺键反应修饰在介孔二氧化锰纳米粒子的表面，再在介孔二氧化锰孔道中物理负载小分子声敏剂，成内部荷载声敏剂，外部共价修饰葡萄糖氧化酶修饰的介孔二氧化锰纳米粒药物组合物；所述的介孔二氧化锰纳米粒的粒径为100-300nm；所述葡萄糖氧化酶与二氧化锰的质量比为1︰5，具体制备方法包括以下步骤：

（1）、制备介孔二氧化锰纳米粒：将7.5-8.0g的十二烷基苯磺酸钠超声溶解于90-110mL的超纯水中，成十二烷基苯磺酸溶液；将1.3-1.5g的碳酸氢钠溶于12-18mL超纯水中配成无色透明溶液；将1-2g的MnCl₂·4H₂O溶于6-12mL的超纯水中配成淡粉色透明溶液；将十二烷基苯磺酸溶液置于50℃油浴下搅拌5-10min，之后加入碳酸氢钠溶液继续搅拌30-40min，再逐滴加入配好的MnCl₂·4H₂O溶液搅拌3-4h，10000-15000rpm离心10min取沉淀，沉淀先用超纯水洗3-5次，再用无水乙醇洗3-5次，50-60℃下烘干24h，研磨后放入马弗炉400℃煅烧5-7h，所得黑色固体粉末即为介孔二氧化锰纳米粒；

（2）、制备氨基化二氧化锰复合物：将介孔二氧化锰粉末15-25mg用7-9mL的无水乙醇超声分散，再向其中加入70-90μL的3-氨丙基三乙氧基硅烷、0.3-0.5mL的超纯水、0.3-0.5mL的浓氨水，室温搅拌10h，离心取沉淀，无水乙醇洗至中性，50-60℃烘干取出研磨成粉末，即得氨基化二氧化锰复合物；

（3）、制备葡萄糖氧化酶修饰的介孔二氧化锰纳米粒：将8-12mg的葡萄糖氧化酶溶于1-3mL的一水吗啉乙磺酸缓冲液中配成亮黄色透明液体；取7-9mg的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺溶于0.5-1.5mL的一水吗啉乙磺酸缓冲液中，成1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺溶液；取5.5-6.5mg的N-羟基琥珀酰亚胺溶于0.5-1.5mL的一水吗啉乙磺缓冲液中，成N-羟基琥珀酰亚胺溶液；取4.5-5.5mg氨基化二氧化锰溶于1-3mL的一水吗啉乙磺酸缓冲液中，成氨基化二氧化锰溶液；向葡萄糖氧化酶溶液中加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺溶液和N-羟基琥珀酰亚胺溶液，在室温下搅拌25-30min，加入氨基化二氧化锰溶液，在室温下搅拌反应4-6h，离心取沉淀，沉淀用磷酸缓冲盐溶液洗涤3-5次，30-40℃烘干取出研磨成粉末，即得葡萄糖氧化酶修饰的介孔二氧化锰纳米粒；

（4）、制备葡萄糖氧化酶修饰的介孔二氧化锰药物组合物：将5-7mg的小分子声敏剂溶于1-3mL无水乙醇中；将5-7mg葡萄糖氧化酶修饰的介孔二氧化锰纳米粒探超分散于5-7mL超纯水中，二者混合后室温搅拌24-48h，10000-15000rpm离心5-10min，得沉淀，沉淀再用体积比1︰1的无水乙醇-水混合液复溶，如此重复2~3遍，冷冻干燥，即得葡萄糖氧化酶修饰的介孔二氧化锰药物组合物；

所述的小分子声敏剂为二氢卟吩、金属酞菁及卟啉类化合物的血卟啉单甲醚中的一种。