[发明专利]从铁锈污染微量生物检材中提取DNA的试剂盒及方法

说明书

本发明提供一种从铁锈污染微量生物检材中提取DNA的试剂盒及方法，包括一种能够高效从铁锈污染微量生物检材中除去铁锈的组合物溶液，该组合物溶液由羟基乙叉二膦酸(HEDP)、十二烷基硫酸钠(SDS)，肌氨酸，十二烷基肌氨酸钠，十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)，胆酸，脱氧胆酸，苯甲酰氨基丙酸(BATC)，辛基苯酚聚乙氧基化物，聚氧乙烯脱水山梨糖醇单月桂酸酯，叔辛基苯氧基聚(氧乙烯)乙醇，1，4‑哌嗪二‑(乙磺酸)，N‑(2‑乙酰氨基)‑2‑氨基乙磺酸，聚乙二醇‑叔辛基苯基醚(Triton.RTM。X‑100)，(1，1，3，3‑四甲基丁基)苯基‑聚乙二醇(Triton.RTM.X‑114)以及水组成，该组合物溶液能够作为释放DNA裂解液应用在微量生物检材中提取DNA试剂盒中。

技术领域

本发明涉及生物检材除杂领域，具体涉及一种能够从铁锈污染微量生物检材中提取DNA的试剂盒及方法。

背景技术

STR-PCR检验技术是法医DNA检验中使用的常规方法，并在实践中发挥了显著作用。但目前对于混合检材、降解检材、微量检材以及被土壤、色素、铁锈等污染的检材，使用常规检验技术难以得到理想的实验结果。虽然已经建立了多种DNA提取纯化技术，以及一些商品化磁珠法DNA提取试剂盒，比如Qiagen的M48，Thermo的Automate、Promega的IQ提取系统等，可以进行高质量的DNA提取，但由于现场检材的来源多样性和样品的复杂性，使用不同方法获得的检验效果也存在很大差异，因此针对不同检材的差异性，选择合适的提取方法是很具有重要意义的。本发明涉及的一种铁锈污染的DNA提取是试剂盒及方法是因为现有的商品化试剂盒如Qiagen的M48，Thermo的Automate、Promega的IQ提取系统等很难从铁锈污染微量生物检材中提取DNA，导致微量生物检材检验失败。

铁锈是一些铁的氧化物的统称，通常为红色，由铁和氧气在潮湿环境下生成。不同情况下会生成不同形式的铁锈。铁锈主要由三氧化二铁水合物Fe2O3·nH2O和氢氧化铁(FeO(OH)，Fe(OH)3)组成。法医物证中铁锈检材的主要来源是盗窃案件中的攀爬痕迹，作案工具等，这一类群检材在法医DNA检验中占很大比例，人体细胞在这些检材上长时间存留后，由于环境中的微生物、核酸酶对DNA的降解以及铁锈对DNA的破坏等原因，使得铁锈斑迹上人DNA的含量严重降解，而现有的成熟商品化磁珠法DNA提取试剂盒很难从这类检材中提出DNA，导致检测失败。因为铁锈主要成分为Fe2O3，FeO(OH)，Fe(OH)3，与磁珠结构相似，首先会干扰DNA结合磁珠，其次会抑制PCR，因此对此类生物检材，如何能高效的除去铁锈是保证其DNA检测的准确性和高效果的前提，现有技术(参见中国专利CN109402113A、CN107267502A、CN108866049A以及CN105647910A等)中针对DNA检测中铁锈的干扰主要是对磁珠进行表面进行修饰改性，异排除铁锈对DNA结合的干扰，但是无法彻底降低铁锈的影响。基于现有技术存在的问题，本发明从源头出发，提供一种能够高效从铁锈污染微量生物检材中除去铁锈的组合物溶液，并以此组合溶液作为裂解液制备相应的DNA提取试剂盒，在源头上除去铁锈，大大提高检测的准确性。

发明内容

本发明提供一种能够高效从铁锈污染微量生物检材中除去铁锈的组合物溶液，并以此组合溶液作为裂解液制备相应的DNA提取试剂盒，大大提高检测的准确性。

本发明提供了一种能够高效从铁锈污染微量生物检材中除去铁锈的组合物溶液，由以下组分组成：羟基乙叉二膦酸(HEDP)、十二烷基硫酸钠(SDS)，肌氨酸，十二烷基肌氨酸钠，十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)，胆酸，脱氧胆酸，苯甲酰氨基丙酸(BATC)，辛基苯酚聚乙氧基化物，聚氧乙烯脱水山梨糖醇单月桂酸酯，叔辛基苯氧基聚(氧乙烯)乙醇，1，4-哌嗪二-(乙磺酸)，N-(2-乙酰氨基)-2-氨基乙磺酸，聚乙二醇-叔辛基苯基醚(Triton.RTM X-100)，(1，1，3，3-四甲基丁基)苯基-聚乙二醇(Triton.RTM.X-114)以及水；除水以外的组分的浓度均在1％-10wt％。

所述组合物溶液还包括TNE。