[发明专利]一种检测HTR2A基因rs6313位点的TaqMan探针实时荧光PCR方法及其引物探针组合

权利要求书

1.一种应用于检测HTR2A基因rs6313位点等位基因的TaqMan探针实时荧光PCR法的特异性引物探针组合，其特征在于，包括以下特异性的上游引物(ARMS)、通用下游引物和探针序列：

上游引物FpC:5’-GCTCTACAGTAATGACTTTAACTTC-3’；

上游引物FpT:5’-GCTCTACAGTAATGACTTTAACTTT-3’；

下游引物Rp：5’-GATGAAGTAAGGAGAGACACGAC-3’；

探针Probe：5’-FAM-TAACACTTCTGATGCATTTAACTGGAC-BHQ2-3’；

其中，FAM为6-carboxyfluorescein；BHQ2为Black Hole Quencher-2。

2.权利要求1所述的特异性引物探针组合在制备针对HTR2A基因rs6313位点等位基因的检测试剂盒方面的用途。

3.权利要求1所述的特异性引物探针组合在构建针对HTR2A基因rs6313位点等位基因的检测模块或基因分型检测仪器方面的用途。

4.一种检测HTR2A基因rs6313位点等位基因的TaqMan探针实时荧光PCR方法，用于非疾病诊断目的，包括以下步骤：

(1)取权利要求1所述特异性引物探针组合；

(2)提取待测样本的基因组DNA；

(3)配置反应体系

分别在两个反应管中构建相同的反应体系，用于FAM通道和VIC通道进行双通道荧光采集；所述反应体系即在反应管中加入所述特异性引物探针组合、内参基因的引物及探针、被测样本的基因组DNA、5×HS HiTaq Buffer(Mg²⁺Plus)、Solution I(10×)、dNTP、HotstartHiTaq DNA polymerase，进行混合；

(4)PCR反应

将配置好的反应体系在实时荧光PCR仪ViiA^TM7上进行扩增，PCR完成后，根据扩增曲线的有无判断被测样本的基因型。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：

选择的内参基因为ACTB，设计的内参基因引物和探针为：

上游引物ACTB-F:5’-CAGCAGATGTGGATCAGCAAG-3’；

下游引物ACTB-R：5’-GCATTTGCGGTGGACGAT-3’；

探针ACTB-P：5’-HEX-AGGAGTATGACGAGTCCGGCCCC-BHQ2-3’；

其中，HEX为6-carboxy-hexachlorofluorescein；BHQ2为Black Hole Quencher-2。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：

以单管反应体系10μl计，反应管中加入特异性的上游引物200nM，通用下游引物200nM，荧光探针100nM；内参基因上下游引物各150～200nM，探针100nM，被测样本基因组DNA10～50ng，HotstartHiTaq DNA polymerase 0.1375μl，5×HS HiTaq Buffer(Mg²⁺Plus)2μl、Solution I(10×)1μl、2.5mM dNTP1μl、ddH₂O补充至终体积10μL。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：

PCR反应参数设置如下：95℃预变性10min；95℃变性15sec，60℃退火40sec；共计40个循环。