[发明专利]一种酶促反应底物浓度检测方法

说明书

本发明涉及生物化学检测领域，具体涉及一种酶促反应底物浓度检测方法，包括以下步骤：步骤一，在检测孔1滴加已知浓度底物溶液，在检测孔2滴加待测底物溶液，检测孔1和检测孔2所含试剂酶活一致；步骤二，设定反应时间，到设定时间后分别检测所述检测孔1和检测孔2的反射光度或颜色；步骤三，根据所述检测孔1检测结果和内置的不同酶活‑反应程度曲线得到试剂酶活；步骤四，根据所述步骤三得到的酶活调用内置的不同底物浓度‑反应程度曲线，根据所述检测孔2的检测结果得到待测底物的浓度。应用本发明酶促反应底物浓度检测方法可降低甚至消除酶活变化对底物浓度测定的影响。

技术领域

本发明涉及生物化学检测领域，具体涉及一种酶促反应底物浓度检测方法。

背景技术

利用干化学酶法来测定底物浓度，操作简便，耗时短，适用于快速检验类项目。

在临床使用中我们发现，许多光电检测设备的干化学试剂，随着储存时间的增加（仍在保质期内）或保存条件不当（温度变化和湿度变化）等因素均会导致酶活下降，影响检测结果，造成误诊。

例如，干化学检测中一些以金属离子为活性中心的工具酶如多酚氧化酶、半乳糖氧化酶等本身的稳定性较差，其活性中心易受分子中硫醇基影响而失活。在实践中发现，正常保存条件下含半乳糖氧化酶的干化学试剂在保质期末（12个月）酶活下降约30%左右。

根据酶促反应的性质可知，酶活的变化会导致反应速度的变化，即酶活变化对底物浓度的测定有较大影响，造成检验结果不准确。临床迫切需要一种检测方法，消除酶活变化导致的检测误差。

发明内容

本发明提供一种酶促反应底物浓度检测方法，应用此检测方法可降低甚至消除酶活变化对底物浓度测定的影响。

本发明技术方案如下：

1.本发明为一种酶促反应底物浓度检测方法，其特点是包括以下步骤：步骤一，在检测孔1滴加已知浓度底物溶液，在检测孔2滴加待测底物溶液，检测孔1和检测孔2所含试剂酶活一致；步骤二，设定反应时间，到设定时间后分别检测所述检测孔1和检测孔2的反射光度或颜色；步骤三，根据所述检测孔1检测结果和内置的不同酶活-反应程度曲线得到试剂酶活；步骤四，根据所述步骤三得到的酶活调用内置的不同底物浓度-反应程度曲线，根据所述检测孔2的检测结果得到待测底物的浓度。

所述已知浓度底物的浓度是选取在检测孔1和检测孔2预制工具酶的检测范围内。

所述不同酶活-反应程度曲线是在已知底物浓度不变条件下制作。

所述不同底物浓度-反应程度曲线是根据所使用工具酶在保质期内活性变化对检测影响的程度确定。

所述不同底物浓度-反应程度曲线是在酶活不变条件下制作。

所述调用内置不同底物浓度-反应程度曲线是调用最接近酶活条件下不同底物浓度-反应程度曲线。

当底物浓度一致时，反应程度随酶活的降低而减小。当酶活下降程度太大会影响试剂的检测范围，即试剂不合格。因此测定试剂酶活后再调用相应酶活条件下的不同底物浓度-反应程度曲线，一方面能使待测底物浓度的检测结果更准确，另一方面当酶活下降程度超出下限还能提示试剂不合格。

不同的酶在其保质期内活性下降程度不同，根据酶活下降对反应的影响程度计算确定内置不同酶活条件下不同底物浓度-反应程度曲线。

当确定了酶活的下降程度和反应曲线，在各节点的酶活条件下分别制作推算不同底物浓度-反应程度的曲线。在测定酶活后调用最接近酶活条件下的不同底物浓度-反应程度曲线。

检测孔1在滴加已知浓度底物后与试剂反应一定时间，利用光电检测设备检测反应进程，根据设备内置的一定底物浓度条件下，不同酶活-反应程度的曲线可得到试剂上的酶活。