[发明专利]一种制备蜘蛛抗菌肽的方法

说明书

本发明公开了一种制备蜘蛛抗菌肽的方法，包括如下步骤：1)按照蜘蛛抗菌肽的氨基酸序列合成肽链，所得到的肽链上第6个和第11个氨基酸带了保护基A，第2个和15个氨基酸带保护基B；2)去除保护基A和保护基B的其中任意一个；3)氧化形成第一对二硫键；4)去除保护基A和保护基B剩下的一个；5)氧化形成第二对二硫键。本发明可以避免制备蜘蛛抗菌肽时错配的问题。

技术领域

本发明属于多肽合成领域，具体涉及一种制备蜘蛛抗菌肽的方法。

背景技术

抗菌肽具有广谱抗菌活性，可以快速查杀靶标，并且其中很多是纯天然的肽，使它迅速成为潜在的治疗药物；抗菌肽的治疗范围为：革兰氏阴性细菌、革兰氏阳性细菌、真菌、寄生虫、肿瘤细胞等。

蜘蛛抗菌肽(Gomesin)，从捕鸟蛛Acanthoscurria gomesiana的血细胞分离得到，由18个氨基酸组成，C端Arg以酰胺结尾，N端为焦谷氨酸Z，序列中含有四个Cys，形成两对二硫键(Cys2与Cys15，Cys6与Cys11)，具体如下：

其中Z为焦谷氨酸(L-pGlu)。

目前Gomesin的制备方法主要有两种：采用Boc固相多肽合成法合成主链，HF脱除全部保护基后再空气氧化形成两对二硫键；采用Fmoc固相多肽合成法合成主链，TFA脱除全部保护基后再空气氧化形成两对二硫键。两种方法最后都是在水溶液中空气氧化形成两对二硫键，配对时选择性不高，容易产生大量错配的副产物。

例如：《Chan，L.Y.，Zhang，V.M.，Huang，Y.-H.，Waters，N.C.，Bansal，P.S.，Craik，D.J.，and Daly，N.L.(2013)Cyclization of theantimicrobial peptide gomesin withnative chemical ligation：influenceson stability and bioactivity.ChemBioChem14，617-624》文献中就提到：按照空气氧化法形成Gomesin的两对二硫键，错配异构体杂质含量高达18％。

基于以上技术应用背景，本发明的发明人欲解决现有制备方法形成二硫键时的错配问题，以及空气氧化下溶剂使用量大的问题。

发明内容

为了解决上述问题，提供一种新的制备蜘蛛抗菌肽的方法。

本发明提供了一种制备蜘蛛抗菌肽的方法，其特征在于：

包括如下步骤：

1)按照蜘蛛抗菌肽的氨基酸序列合成肽链，所得到的肽链上第6个和第11个氨基酸带了保护基A，第2个和15个氨基酸带保护基B；所述蜘蛛抗菌肽的氨基酸的肽链为：

2)去除保护基A和保护基B的其中任意一个；

3)氧化形成第一对二硫键；

4)去除保护基A和保护基B剩下的一个；

5)氧化形成第二对二硫键。

如前述的方法，步骤1)所述肽链合成是按照蜘蛛抗菌肽的氨基酸序列，将已保护的氨基酸依次偶联在固相载体上。

如前述述的方法，步骤1)的固相载体为酰胺功能化的树脂。

进一步地，步骤1)的固相载体为Rink Amide AM Resin、Rink Amide MBHA Resin或Siber Resin中的一种。

进一步地，步骤1)的固相载体为Rink Amide MBHA Resin。

如前述的方法，步骤1)的固相载体取代度值为0.1～2.0mmol/g。