[发明专利]壳聚糖纳米级超声造影剂联合Dickkopf-2基因在制备治疗前列腺癌药物中的应用

说明书

本发明涉及壳聚糖纳米级超声造影剂联合Dickkopf‑2基因在制备治疗前列腺癌药物中的应用。本发明首次发现了Dickkopf‑2基因与前列腺癌的关系，在前列腺癌患者组织中Dickkopf‑2基因的表达明显降低，以壳聚糖纳米级超声造影剂为传递载体，将Dickkopf‑2基因定向输送到肿瘤组织中，通过Dickkopf‑2基因的表达抑制肿瘤细胞的增殖。本发明制备的壳聚糖纳米级超声造影剂以壳聚糖为壳膜材料，安全无毒、生物相容性好、成本较低，粒径在纳米级范围，能顺利通过肿瘤组织血管壁间隙，将目的基因传递至肿瘤组织，并且可以联合超声靶向破坏微泡技术显著提高基因转染效率。

技术领域

本发明涉及壳聚糖纳米级超声造影剂联合Dickkopf-2基因在制备治疗前列腺癌药物中的应用，属于生物医药技术领域。

背景技术

随着基因治疗关键技术的不断突破，多种疾病的临床治疗将有更多的新选择。许多疾病具有明确的病变部位，尤其是肿瘤。因而，寻找到一种能够有效地将治疗基因递送到病变部位的方法非常重要。在过去的几十年里，病毒载体由于其高效的基因传递效率而在基因治疗领域占据主导地位。然而，其安全问题限制了应用。病毒载体的这一局限性加快了寻找替代非病毒传递载体的步伐。在非病毒载体中，超声造影剂是一种很有前途的基因传递系统，已成功地用于基因的体内外传递。壳聚糖是一种具有良好生物相容性及生物可降解性的天然多糖，其分子链中存在大量氨基且带正电荷，已成功应用于核酸等生物大分子的研究，是一种理想的超声造影剂壳膜材料。

超声造影剂不仅能显著增强超声显像，还可以携载目的基因，实现并增强基因的转染和表达。同时，超声靶向微泡破坏(Ultrasound-targeted microbubble destruction,UTMD)技术可以实现时空可控的基因传递，使治疗效果最大化。因而，超声与超声造影剂相结合，为基因的时空调控传递提供了一个很有前景的平台。

前列腺癌(prostate cancer，PCa)是来源于前列腺上皮的恶性肿瘤，是中老年男性高发的恶性肿瘤。早期前列腺癌患者手术治疗预后良好，中晚期多采用去势治疗为主的内分泌综合治疗，多数患者会逐渐转变为去势抵抗性前列腺癌(castration-resistantprostate cancer,CRPC)，死亡率高，治疗效果差。最近的数据表明，Wnt信号通路在调控肿瘤的发生和发展中起着关键作用。Wnt通路受多种分泌拮抗剂家族调控，包括可溶性卷曲相关受体和dickkopfs(DKK)等。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了壳聚糖纳米级超声造影剂联合Dickkopf-2基因在制备治疗前列腺癌药物中的应用，以壳聚糖纳米级超声造影剂为非病毒载体，携载Dickkopf-2基因，用于制备治疗前列腺癌的药物。

术语说明：

室温：具有本技术领域公知的含义，一般是指25±2℃。

本发明的技术方案如下：

壳聚糖纳米级超声造影剂联合Dickkopf-2基因在制备治疗前列腺癌药物中的应用，所述应用是将壳聚糖纳米级超声造影剂与Dickkopf-2基因连接制备得到壳聚糖纳米级超声造影剂/Dickkopf-2基因复合物，并将所述复合物应用于治疗前列腺癌药物的制备。

根据本发明优选的，所述壳聚糖纳米级超声造影剂是由全氟己烷内核和壳聚糖外壳构成，所述壳聚糖和全氟己烷的质量体积比为(25～35):1，单位是g/L。

根据本发明优选的，所述壳聚糖纳米级超声造影剂是按照以下步骤制备得到的：

(1)配制体积分数为1％乙酸溶液，将壳聚糖加入到所述乙酸溶液中，溶解后制备得到壳聚糖溶液；

(2)将全氟己烷、吐温20和卵磷脂分散于去离子水中制成悬液，均质化，得到乳化产物Ⅰ；