[发明专利]一种用于检测EV71病毒的引物组合、试剂盒和PSR方法

说明书

本发明公开了一种用于检测EV71病毒的引物组合、试剂盒和PSR方法，属于生物检测技术领域。本发明用引物组合对待测样品进行PSR反应，检测PSR反应产物，确定待测样品是否含有EV71病毒。本发明的方法操作简便，反应时间短，灵敏度高，特异性强，且与其他病毒无交叉扩增。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，更具体的说是涉及一种用于检测EV71病毒的引物组合、试剂盒和PSR方法。

背景技术

手足口病是由肠道病毒引起的传染病，主要通过粪口途径和密切接触传染，多发于三岁以下的婴幼儿，可引起手、足、口腔等部位的疱疹，重症患儿可引起心肌炎、肺水肿、无菌性脑膜炎等并发症。引发手足口病的肠道病毒中最重要的是肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A16型(CoxA16)，可引起严重的中枢神经系统病变，病死率高。

EV71病毒的分离培养烦琐、费力、耗时比较长、不能满足早期诊断要求，因此不太适合用培养法鉴定这种病毒；另一种常规的检测方法为血清学检测，但灵敏度低，易产生假阳性结果；核酸检测方面主要以RT-PCR为主，但该方法对仪器要求较高，不利于在小型医院与现场检测环境下推广。

因此，提供一种EV71病毒的检测方法是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种用于检测EV71病毒的引物组合、试剂盒和PSR方法，操作简单，灵敏度高，特异性强。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种用于检测EV71病毒的引物组合，具体引物序列如下：

EV71-Ft2：5’-AGTCGTCGAACCTCACGACCGAGATAGCGTGAGCAGAGCC-3’；SEQ ID NO.4；

EV71-Bt2：5’-CCAGCACTCCAAGCTGCTGAAAGAACACAGCGTGTCTCAA-3’；SEQ ID NO.5；

EV71-IF：5’-GCGCTGGTAGAGCTTGAGTG-3’；SEQ ID NO.6；

EV71-IB：5’-GGAGCATCATCAAATGCTAGTGACG-3’；SEQ ID NO.7。

进一步，含有上述引物组合的试剂盒。

进一步，所述试剂盒还包括双指示系统和阳性对照。

进一步，所述双指示系统包括显色液和/或荧光染料；所述显色液包括0.08mM甲酚红和0.02mM苯酚红；所述荧光染料为SYBR Green I或EveGreen。

进一步，一种用于检测EV71病毒的PSR方法，包括如下步骤：用上述的引物组合对待测样品进行PSR反应，检测PSR反应产物，确定待测样品是否含有EV71病毒。

进一步，所述PSR反应体系如下：12.5μl的2×RM，2.0μl DNA模板和1.0μl Bst DNA聚合酶，1.0μl AMV逆转录酶，引物的EV71-Ft2、EV71-Bt2各1.6μM，EV71-IF、EV71-IB各0.8μM，并用水补齐25μl。

进一步，所述PSR反应条件为61-67℃，40-60min。

进一步，所述检测PSR反应产物确定待测样品是否含有EV71病毒的方法为：若能扩增，则待测样品含有EV71病毒；若不能扩增，则待测样品不含有EV71病毒。

进一步，所述检测PSR反应产物确定待测样品是否含有EV71病毒的方法为a、b或c：