[发明专利]一种直接测定糖化血红蛋白含量的检测方法

说明书

一种直接测定糖化血红蛋白含量的检测方法，包括以下步骤：A、取EDTA抗凝全血样本与溶血剂按照1:100进行稀释；B、先取4μL的溶血样本加入试剂R1中；所述试剂R1含有聚苯乙烯胶乳微球；C、经5min温预后再加入试剂R2；所述试剂R2是鼠抗人HbA1c单克隆抗体、羊抗鼠IgG抗体和甘氨酸缓冲液的混合液；D、免疫反应在600nm～700nm的波长光下，通过全自动生化分析仪读取反应后的吸光度；E、最终根据反应吸光度之间的差值，从校准曲线中直接读取糖化血红蛋白的百分比含量。本发明方法以免疫透射比浊法为检测原理，不需要测定EDTA抗凝全血样本中的总血红蛋白及糖化血红蛋白含量，即可直接确定其中的糖化血红蛋白百分比。

技术领域

本发明属于医学免疫类领域，特别属于糖化血红蛋白检测技术领域，涉及一种直接测定糖化血红蛋白含量的检测方法，尤其涉及一种利用全自动生化分析仪可以直接测定糖化血红蛋白百分比含量的检测方法。

背景技术

糖化血红蛋白(glycosylated hemoglobin，HbA1c)是人体血液中红细胞内的血红蛋白与血糖结合的产物。血糖和血红蛋白的结合生成糖化血红蛋白是不可逆反应，并与血糖浓度成正比，且保持120天左右，所以可以观测到120天之前的血糖浓度，糖化血红蛋白可以稳定可靠地反映出检测前120天内的平均血糖水平，且受抽血时间，是否空腹，是否使用胰岛素等因素干扰不大。

糖化血红蛋白于1958年被使用色谱法首次从其它类型的血红蛋白中分离出来，并于1968 年被分类为一种糖蛋白。1975年研究者们得到了生成糖化血红蛋白的反应式。根据每个糖化位点和反应参与物，总的糖化血红蛋白分成若干个亚组分。糖化血红蛋白天然(非糖化)血红蛋白是A0(2α、2β链)。亚组分(HbA1a1、HbA1a2、HbA1b和HbA1c)因血红蛋白β链-N末端缬氨酸的游离氨基与不同碳水化合物糖基化而形成；这些亚组分总称为HbA1。除了血红蛋白β链的N末端缬氨酸外，血红蛋白分子内其他游离氨基也参与糖基化(α链N末端缬氨酸、赖氨酸ε-氨基)。相对于HbA1，所有β-链N末端和其他游离氨基糖基化的血红蛋白被称作总糖化血红蛋白。除基本的成人血红蛋白AO外，在健康人里发现少量的胎儿血红蛋白HbF(2α、 2γ链)和血红蛋白A2(2α、2δ链)。缬氨酸在δ链N末端，以类似的方式糖基化，例如，通过与葡萄糖的共价键形成HbA2c。亲和层析测定的糖化血红蛋白作为总糖化血红蛋白。

常用的测定糖化血红蛋白百分比的方法有离子交换层析、高效液相色谱、免疫法、酶法等。其中离子交换层析、高效液相色谱法需要特定的仪器，价格昂贵，不适用于中小型医院的使用。酶法检测糖化血红蛋白是利用氧化还原反应，需要多种酶的参与。而临床上常使用的免疫学方法有两种，一种是需要单独测定血液样本中的总血红蛋白和糖化血红蛋白的浓度，并且随后计算糖化血红蛋白与总血红蛋白的比值的免疫竞争抑制法，另一种是可以直接测定糖化血红蛋白百分比的胶乳凝集法。这些检测方法操作复杂、耗时，且需要特殊的仪器，成本较高，市场上也存在其它检测方法，但是普遍存在测定准确度低的缺陷。

因此，如何解决上述问题，是本领域技术人员着重要研究的内容。

发明内容

为克服上述现有技术中的不足，本发明目的在于提供一种直接测定糖化血红蛋白含量的方法；

为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供一种直接测定糖化血红蛋白含量的检测方法，所述糖化血红蛋白含量在检测时所用到的试剂包含有试剂R1、试剂R2、溶血剂、聚苯乙烯胶乳微球、鼠抗人HbA1c单克隆抗体、羊抗鼠IgG抗体和甘氨酸缓冲液，所述检测方法包括以下步骤：

A、取EDTA抗凝全血样本与溶血剂按照1:100进行稀释；

B、先取4μL的溶血样本加入试剂R1中；所述试剂R1含有聚苯乙烯胶乳微球；

C、经5min温预后再加入试剂R2；所述试剂R2是鼠抗人HbA1c单克隆抗体、羊抗鼠IgG抗体和甘氨酸缓冲液的混合液；