[发明专利]一种用于Vero细胞培养及相应病毒生产的低血清培养基

说明书

本发明公开了一种用于Vero细胞培养及相应病毒生产的低血清培养基，包括以下组成成分：氨基酸、维生素、无机盐类、蛋白质和辅助成分，所述氨基酸包括甘氨酸、盐酸精氨酸、谷氨酰胺、盐酸赖氨酸、丝氨酸、酪氨酸二钠盐二水合物、缬氨酸；所述蛋白质包括全组分白蛋白、水解乳蛋白(LAH)、饱和铁人转铁蛋白、全链重组胰岛素、4‑羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)；本发明制备的培养基在用于Vero细胞扩增猪流行性腹泻病毒的疫苗生产中，配方成分简单，成本低廉且易获取，有效提升细胞的培养效果的同时保持细胞良好的生长状态。

技术领域

本发明涉及生物制药疫苗生产领域，具体是一种用于Vero细胞培养及相应病毒生产的低血清培养基。

背景技术

Vero细胞是世界卫生组织和中国生物制品规程认可的病毒疫苗生产细胞系。采用vero细胞培养技术生产的病毒疫苗主要包括狂犬病疫苗、脊髓灰质炎疫苗、流感疫苗、乙型脑炎疫苗、出血热疫苗和手足口病疫苗等。Vero细胞有贴壁特性，很大程度上决定了病毒疫苗的生产是通过Vero细胞的微载体固定化培养而得以实现。

但是传统Vero细胞培养的培养方式为MEM培养基添加10％小牛血清培养细胞，血清用量大，成本高。降低血清培养会出现细胞生长慢、细胞死亡等情况。部分市售低血清培养基不能满足生产要求，无法在低血清培养条件下保持细胞优良的生长状态，同时保持疫苗生产半成品毒价稳定。Vero细胞扩增猪流行性腹泻病毒有两种生产方式，添加胰酶工艺对细胞培养基比较挑剔，市售低血清培养基大多无法满足要求，基于此，我们提出一种用于Vero细胞低血清培养的培养基。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于Vero细胞培养及相应病毒生产的低血清培养基，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种用于Vero细胞培养及相应病毒生产的低血清培养基，包括以下组成成分：氨基酸、维生素、无机盐类、蛋白质和辅助成分，所述氨基酸包括甘氨酸15-25mg/L、丙氨酸5-10mg/L、盐酸精氨酸200-270mg/L、一水天门冬酰胺50-60mg/L、天门冬氨酸8-11mg/L、一水盐酸半胱氨酸5-10mg/L、二盐酸胱氨酸50-70mg/L、谷氨酸8-15mg/L、谷氨酰胺400-600mg/L、一水盐酸组氨酸25-50mg/L、异亮氨酸60-75mg/L、亮氨酸60-75mg/L、盐酸赖氨酸80-110mg/L、甲硫氨酸50-75mg/L、苯丙氨酸40-50mg/L、脯氨酸10-15mg/L、丝氨酸80-110mg/L、苏氨酸50-75mg/L、色氨酸10-15mg/L、酪氨酸二钠盐二水合物250-320mg/L、缬氨酸50-75mg/L、羟脯氨酸8-12mg/L、鸟氨酸20-30mg/L、抗坏血酸膦酸酯钠1-5mg/L、生物素0.1-0.5mg/L；所述蛋白质包括全组分白蛋白200-500mg/L、水解乳蛋白(LAH)300-600mg/L、饱和铁人转铁蛋白5-10mg/L、全链重组胰岛素5-10mg/L、4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)1200-1500mg/L；所述辅助成分包括D-葡萄糖

2000-4000mg/L、乙醇胺1-5mg/L、次黄嘌呤钠1-5mg/L、亚油酸0.1-0.5mg/L、酚红5-10mg/L、腐胺二盐酸1-5mg/L、丙酮酸钠100-120mg/L、半乳糖100-300mg/L、腺嘌呤10-15mg/L、果糖100-200mg/L、海藻糖500-800mg/L、胸腺嘧啶核苷0.5-1mg/L。

作为本发明进一步的方案：所述维生素包括氯化胆碱5-7mg/L、D-泛酸钙1-5mg/L、叶酸1-5mg/L、烟酰胺1-5mg/L、烟酸0.005-0.01mg/L、吡哆素盐酸盐1-5mg/L、盐酸吡哆醛0.02-0.08mg/L、核黄素0.1-0.5mg/L、盐酸硫胺素10-15mg/L、维生素B121-5mg/L、i-肌醇8-10mg/L、维生素A醋酸酯1-5mg/L。