[发明专利]近红外发光的生物质量子点和对ONOO-特异性响应的NIR比率荧光探针及其制备方法和应用

权利要求书

1.NIR比率荧光探针的制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤：

S21:取10mL生物质量子点HL-BQDs溶液，加入32-38μL浓度为3.7-3.9mmol/L Cy7 NHSester，搅拌反应55-65min，转移至MWCO:1800-2500Da的透析袋中透析23-25h,以去除多余的Cy7 NHS ester；

S22：在透析后的溶液中加入0.08-0.11g 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)和0.008-0.011g N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，搅拌28-35min，加入32-36μL浓度为2.2-2.3mmol/LCy7-NH₃⁺搅拌55-65min后,将溶液转移至MWCO:1800-2500Da的透析袋中透析22-25h，除去多余的Cy7-NH₃⁺，即得到HL-BQDs-Cy7溶液。

2.根据权利要求1所述的NIR比率荧光探针的制备方法，其特征在于所述生物质量子点溶液按以下制备方法制成，其中材料份是按份搭配：

S11：制备叶绿素粗提取液，将18-22g洗净晾干的冬青树叶和18-22mL的无水乙醇在破碎装置中打碎，再将破碎后的冬青树叶溶液倒入烧杯中，加入8-11mL丙酮，搅拌均匀后静置，过滤得到叶绿素粗提液；

S12：在圆底三口烧瓶中加入18-21mL油酸及0.04-0.06g NH₂-PEG-NH₂,充入氩气并在搅拌下升温至245-255℃，待溶液变成橙红色后停止加热，冷却至室温后加入4-6mL叶绿素粗提取液，搅拌均匀后继续升温至175-185℃，在搅拌下反应160-200min，冷却至室温后,加入12mol/L的HCl至溶液为强酸性，再在27-33℃下搅拌反应11-13h；

S13：将混合液转移至分液漏斗，加入0.8-1.2mL超纯水，摇匀,静置分层后，将下层溶液其转移至烧杯中,并用饱和NaOH溶液调节溶液pH至中性,用水系滤膜过滤,以去除其中的大颗粒物质；

S14：将滤液转移至透析袋中，在超纯水中透析22-25h后，得到源于冬青树叶的生物质量子点HL-BQDs溶液。

3.根据权利要求2所述的NIR比率荧光探针的制备方法，其特征在于:

在步骤S13中，用0.2-0.4μm水系滤膜过滤；

在步骤S14中，透析袋的型号为MWCO:800-2000Da。

4.NIR比率荧光探针，其特征在于所述NIR比率荧光探针是根据权利要求1-3任一项所述的制备方法制成。

5.根据权利要求4所述的NIR比率荧光探针应用，其特征在于用于测定生物体内ONOO-的含量。

6.根据权利要求5所述的NIR比率荧光探针应用，其特征在于以比率成像分析来测定生物体内ONOO-的含量。