[发明专利]NOTCH2NLC基因GGC重复序列扩增的方法在审
| 申请号： | 201910854820.X | 申请日： | 2019-09-10 |
| 公开（公告）号： | CN112553299A | 公开（公告）日： | 2021-03-26 |
| 发明（设计）人： | 邓健文;王朝霞 | 申请（专利权）人： | 北京大学第一医院 |
| 主分类号： | C12Q1/6806 | 分类号： | C12Q1/6806;C12Q1/6883 |
| 代理公司： | 北京三聚阳光知识产权代理有限公司 11250 | 代理人： | 闫聪彦 |
| 地址： | 100034 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | notch2nlc 基因 ggc 重复 序列 扩增 方法 | ||
1.一种NOTCH2NLC基因GGC重复序列扩增的方法，其特征在于，所述NOTCH2NLC基因GGC重复序列扩增的PCR反应程序为：98℃下反应10分钟；然后进行9个循环：98℃反应30秒，66℃反应15秒，每个循环下降1℃，72℃下反应4分钟；接着是30个循环：98℃反应30秒，58℃反应15秒，72℃反应4分钟；最后72℃延伸，10分钟。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括NOTCH2NLC基因GGC重复序列的PCR扩增反应体系：
Prime STAR GXL DNA聚合酶，0.25U；
5×PrimeSTAR GXL缓冲液，浓度为1x；
dATP，dTTP和dCTP，各200μM；
7-Deaza-dGTP，200μM；
二甲基亚砜，体积比5％；
甜菜碱，1M；
引物NOTCH2NLC-F，0.3μM；
引物M13-Linker-R，0.3μM；
引物M13-(GGC)4(GGA)2-R，0.15μM。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述引物NOTCH2NLC-F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述引物M13-LINKER-R的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述引物M13-(GGC)4(GGA)2-R的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，7-Deaza-dGTP采用New EnglandBiolabs N0445S。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所有循环步骤的变温速率为1℃/秒。
6.一种用于NOTCH2NLC基因GGC重复序列扩增的试剂盒，其特征在于，包括权利要求2中的NOTCH2NLC基因GGC重复序列的PCR扩增反应体系和/或权利要求3中的引物。
7.权利要求1-5任一项所述的NOTCH2NLC基因GGC重复序列扩增的方法或权利要求6所述的用于NOTCH2NLC基因GGC重复序列扩增的试剂盒在检测NOTCH2NLC基因或制备检测NOTCH2NLC基因制剂中的用途。
8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，为检测NOTCH2NLC基因中重复序列GGC或制备检测NOTCH2NLC基因中重复序列GGC制剂中的用途。
9.一种检测NOTCH2NLC基因中重复序列GGC的方法，其特征在于，包括利用权利要求1-5任一项所述的NOTCH2NLC基因GGC重复序列扩增的方法或权利要求6所述的用于NOTCH2NLC基因GGC重复序列扩增的试剂盒。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，包括如下步骤：
获得待测样品基因组DNA；
利用权利要求1-5任一项所述的NOTCH2NLC基因GGC重复序列扩增的方法或权利要求6所述的用于NOTCH2NLC基因GGC重复序列扩增的试剂盒PCR扩增NOTCH2NLC基因；
检测所得的扩增产物中重复序列GGC。
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