[发明专利]用于检测高致病性H7N9禽流感病毒的RT-LAMP引物及方法

说明书

本发明公开了一种用于检测高致病性H7N9禽流感病毒(HP‑H7N9)的RT‑LAMP引物及方法。本发明建立的HP‑H7N9 RT‑LAMP检测方法，可特异性检测HP‑H7N9，而与低致病性H7N9流感病毒(LP‑H7N9)、H7N3流感病毒、H3N2流感病毒、H5N1禽流感病毒、H5亚型禽流感病毒(Re‑6疫苗株)、H5亚型禽流感病毒(Re‑8疫苗株)、H7亚型禽流感病毒(Re‑1疫苗株)、H9亚型禽流感病毒、甲型H1N1流感病毒(H1N1)、传染性法氏囊病病毒(IBDV)、鸡传染性支气管炎病毒(IBV)、新城疫病毒(NDV)等不发生交叉反应；可检测到最低浓度为5.94×10⁴copies/μL的阳性质粒；耗时仅为1.5～2h；检测成本较低；是HP‑H7N9快速检测的良好方法。

技术领域

本发明涉及一种用于检测高致病性H7N9禽流感病毒的RT-LAMP引物及方法。

背景技术

甲型H7N9流感病毒是禽流感病毒的一个亚型，原本属于低致病性流感病毒，仅在禽鸟中发现和传播。该病毒对禽鸟类的致死率低，经基因交换后具备了感染人类的能力，人感染H7N9病例的病发期短、重症率与死亡率均相对于SARS略高。

2013年3月底人类感染H7N9禽流感病毒病例在上海和安徽两地首次出现。该H7N9流感病毒基因来自于东亚地区野鸟和中国上海、浙江、江苏鸡群的基因重配。该病毒的血凝素蛋白(HA)基因在遗传学上不同于其他H7亚型病毒的HA基因，其6条内部基因片段来源于循环在东亚鸟类中的甲型H9N2流感病毒。神经氨酸酶蛋白(NA)基因与前些年在鸟类中发现的甲型H11N9病毒的NA基因片段相似。冬春之际反复出现的H7N9禽流感此前一直被认为是低致病性禽流感(Low pathogenic H7N9 influenza virus,LP-H7N9)，农业部将它划为二类动物疫病。2013年11月，人感染H7N9禽流感被国家卫计委疾病预防控制局纳入法定乙类传染病，是出入境卫生检疫和进出境动物检疫的重要疫病之一。

2017年春爆发的第五波人感染H7N9流感疫情，呈现出与往年不同的特征与趋势：感染病例增多、分布地区广、散发程度高等特点。2017年2月，广东省疾病预防控制中心报道该中心1月份对两例人感染H7N9病例分离到的病毒分别进行基因测序分析，发现在该两株病毒的血凝素(HA)裂解位点发生基因插入性突变，提示该病毒已突变为对禽高致病性的H7N9病毒(Hightly pathogenic H7N9 influenza virus,HP-H7N9)。农业部门的实验室也从广东的4份禽标本中发现类似变异的病毒。

H7N9变异株成为高致病性病毒后，将对家禽生产带来非常严重的影响。致病性的增高意味着该病毒可造成禽只的大量死亡，蛋鸡的生产性能也将受到严重影响。而高致病性禽流感作为全世界高度关注的一类动物疫病，它对国内和国际动物贸易、社会经济生活等将产生深远影响。

现有技术中已有针对2013年以来发生的人感染H7N9禽流感病毒(经典H7N9毒株)的检测方法，如CN105200161A、CN103740863A、CN105861758A，及文献《H7N9禽流感病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立与评价》、《逆转录环介导等温扩增技术检测H7N9禽流感病毒基因》。但是，这些方法只能检测到经典的H7N9病毒，但不能识别对家禽更具威胁的高致病性H7N9毒株。

建立了一种快速、特异、高通量、低成本的新型诊断方法对主动应对H7N9禽流感病毒的基因变异，为新发高致病性H7N9禽流感病毒(HP-H7N9)的快速准确诊断做好准备具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于检测高致病性H7N9禽流感病毒的RT-LAMP引物及方法。

本发明所采取的技术方案是：

一种用于检测高致病性H7N9禽流感病毒的RT-LAMP引物，包括一对外引物F3、B3，一对内引物FIP、BIP，其核苷酸序列如下所示：