[发明专利]用于检测高致病性H7N9禽流感病毒的RT-LAMP引物及方法在审
| 申请号： | 201910823822.2 | 申请日： | 2019-09-02 |
| 公开（公告）号： | CN110551850A | 公开（公告）日： | 2019-12-10 |
| 发明（设计）人： | 杨素;黄海超;陈轩;赵福振;沙才华;邵建宏 | 申请（专利权）人： | 拱北海关技术中心 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/93 |
| 代理公司： | 44205 广州嘉权专利商标事务所有限公司 | 代理人： | 郑莹 |
| 地址： | 519000 *** | 国省代码： | 广东;44 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 疫苗株 流感病毒 鸡传染性支气管炎病毒 传染性法氏囊病病毒 甲型H1N1流感病毒 禽流感病毒 特异性检测 新城疫病毒 低致病性 高致病性 交叉反应 快速检测 阳性质粒 可检测 检测 耗时 | ||
1.一种用于检测高致病性H7N9禽流感病毒的RT-LAMP引物，包括一对外引物F3、B3，一对内引物FIP、BIP，其核苷酸序列如下所示：
F3：5’-ACTTGCCATTTCAGAACATAGA-3’(SEQ ID NO：1)；
B3：5’-CTATCAACTTAAATTGTTGGTTGGT-3’(SEQ ID NO：2)；
FIP：5’-GCCTCTCGCAGTCCGTT-TCTTCTGCTGGCAACAGG-3’(SEQ ID NO：3)；
BIP：5’-GCCTAATTGATGGTTGGTATGGTT-ATTGCCGATTGAGTGCTT-3’(SEQ ID NO：4)。
2.一种用于检测高致病性H7N9禽流感病毒的试剂盒，其特征在于：含有权利要求1所述的RT-LAMP引物。
3.一种检测高致病性H7N9禽流感病毒的RT-LAMP方法，其特征在于：包括以下步骤：
1)从样品中提取病毒核酸；
2)以步骤1)中提取的核酸为模板，用权利要求1所述的引物对F3、B3、FIP和BIP进行RT-LAMP反应获得扩增产物；
3)对扩增产物进行分析，确定样品中是否含有高致病性H7N9病毒。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：步骤2)中RT-LAMP反应体系为：
其中，内引物浓度为0.4μM～1.6μM，外引物浓度为0.05μM～0.2μM。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：内引物浓度为1.2μM，外引物浓度为0.1μM。
6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：RT-LAMP反应温度为58℃～65℃。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：RT-LAMP反应温度为60℃～64℃；优选地，荧光PCR反应温度为60℃。
8.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：RT-LAMP反应时间为50min～60min；优选地，荧光PCR反应时间为60min。
9.根据权利要求3～8任一项所述的方法，其特征在于：步骤3)中对扩增产物进行分析是指对扩增曲线进行分析，当阴阳性对照均成立时，无“S”型扩增曲线的样品判定为阴性，有“S”型扩增曲线的样品判定为阳性。
10.根据权利要求3～8任一项所述的方法，其特征在于：步骤3)中对扩增产物进行分析是指在扩增产物中加入显色液，呈橙色判定为阴性，呈绿色判定为阳性。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于拱北海关技术中心，未经拱北海关技术中心许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201910823822.2/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
