[发明专利]用于啶虫脒和吡虫啉联合毒性评价的电化学细胞传感器的构建方法及其应用

权利要求书

1.用于啶虫脒和吡虫啉联合毒性评价的电化学细胞传感器的构建方法，其特征是：首先制备尺寸可控的银纳米粒子/组氨酸功能化石墨烯量子点/还原氧化石墨烯Ag/His-GQD/rGO三维复合材料，复合材料修饰到玻碳电极表面后，L-半胱氨酸通过巯基结合到复合材料上，再将已经活化的叶酸通过酰胺键与L-半胱氨酸结合，固定细胞，通过电化学阻抗技术进行测定，制得电化学细胞传感器，所述细胞为Hep G2细胞。

2.如权利要求1所述用于啶虫脒和吡虫啉联合毒性评价的电化学细胞传感器的构建方法，其特征是：所述尺寸可控的三维复合材料的制备方法如下：称取氧化石墨分散于水中，超声得到分散液，搅拌条件下加入组氨酸功能化石墨烯量子点，得到均匀的分散液；使用NaOH调节溶液至中性，缓慢的加入硝酸银溶液，随着硝酸银量的增加，出现沉淀，离心，洗涤，获得Ag/His-GQD/GO；对样品进行冷冻干燥，最后在氮气保护下，高温还原后获得Ag/His-GQD/rGO三维复合材料。

3.如权利要求2所述用于啶虫脒和吡虫啉联合毒性评价的电化学细胞传感器的构建方法，其特征是：所述尺寸可控的三维复合材料的制备方法如下：配置不同浓度的硝酸银，根据硝酸银所加入的量来调控银纳米粒子的粒径及分布。

4.如权利要求1所述用于啶虫脒和吡虫啉联合毒性评价的电化学细胞传感器的构建方法，其特征是：传感器的构建方法如下：

（1）所述的Ag/His-GQD/rGO三维复合材料，溶于DMF中，超声处理后，滴加壳聚糖，继续超声至分散均匀，使用微量进样器移取溶液滴于已处理好的玻碳电极表面，放置过夜；

（2）L-半胱氨酸通过自身的巯基结合到电极上；

（3）通过1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺活化叶酸，然后通过与L-半胱氨酸发生酰胺反应，从而使叶酸修饰到电极表面，制得电化学细胞传感器。

5.用于啶虫脒和吡虫啉联合毒性评价的电化学细胞传感器的应用，其特征是：通过对权利要求1-4任一项所述构建方法得到的电化学细胞传感器进行刺激和孵育实现对细胞浓度的测定。

6.如权利要求5所述用于啶虫脒和吡虫啉联合毒性评价的电化学细胞传感器的应用，其特征是：所述细胞测定方法如下：取出已经构建的电化学细胞传感器放入已经使用啶虫脒和吡虫啉标准品刺激后的细胞，37℃下孵育7-9小时，通过测定阻抗值来考察电极界面的变化，从而实现对细胞的测定，同时实现对啶虫脒和吡虫啉联合毒性评价。