[发明专利]促生水稻与降镉的微生物菌剂及其制备方法和使用方法

权利要求书

1.一种促生水稻与降镉的微生物菌剂，其特征在于，所述促生水稻与降镉的微生物菌剂包括以数量百分比计的如下成分：格氏利斯特氏菌(Listeria grayi)46％-53％，伯克氏菌(Burkholderia sp.)20％-25％，施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)6％-13％，枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)9％-20％，棘孢小单孢菌(Micromonospora echinospora)6％-12％。

2.根据权利要求1所述的一种促生水稻与降镉的微生物菌剂，其特征在于，所述菌剂包括以数量百分比计的如下成分：格氏利斯特氏菌(Listeria grayi)50％，伯克氏菌(Burkholderia sp.)20％，施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)10％，棘孢小单孢菌(Micromonospora echinospora)10％，枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)20％。

3.根据权利要求1所述的一种促生水稻与降镉的微生物菌剂，其特征在于，所述格氏利斯特氏菌(Listeria grayi)保藏号为CCTCC AB 97019，所述伯克氏菌(Burkholderia sp.)保藏号为CCTCC AB 209362，所述施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)保藏号为CICCNO.10402，所述棘孢小单孢菌(Micromonospora echinospora)保藏号为CCTCC NO.205694，所述枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)保藏号为CICC AB 10732。

4.一种如权利要求1或2所述的一种促生水稻与降镉的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，所述格氏利斯特氏菌(Listeria grayi)、所述伯克氏菌(Burkholderia sp.)、所述施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)、所述棘孢小单孢菌(Micromonosporaechinospora)、所述枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌株经固体斜面活化后，分别接种于液体培养基中进行扩大培养48-72h，然后分别加入发酵培养基，以葡萄糖作为碳源，牛肉膏作氮源，以氯化钙为无机盐，调节培养基pH值，在30℃，170r/min条件下培养36-60h，按照所述数量百分比将各菌株的发酵液混合即得到所述微生物菌剂。

5.根据权利要求4所述的一种促生水稻与降镉的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，

所述格氏利斯特氏菌的液体培养基的配方为：琼脂2.5g/L，明胶80g/L，葡萄糖10g/L，灭菌脱纤维羊血或兔血6g/L调整pH至7.2-9.6；

所述伯克氏菌的液体培养基的配方为：甘露醇10g/L，硫酸铵2g/L，蛋白胨2g/L，磷酸氢二钾0.5g/L，硫酸镁0.5g/L，氯化钠0.1g/L，硫酸亚铁0.05g/L，硫酸锰0.05g/L，调整pH值至7.0；

所述施氏假单胞菌的液体培养基配方为：胰蛋白胨15g/L，大豆胨5.0g/L，氯化钠5.0g/L，琼脂13g/L，调整pH至7.0；

所述棘孢小单孢菌的液体培养基的配方为：蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L，氯化钠10g/L，调整pH至7.0；

所述枯草芽孢杆菌的液体培养基的配方为：牛肉膏10g/L，琼脂2g/L，蛋白胨2g/L，磷酸氢二钾0.5g/L，硫酸镁0.5g/L，氯化钠0.1g/L，硫酸亚铁0.05g/L，硫酸锰0.05g/L，调整pH值至7.0；

将保存在液氮中的菌种冻干粉接种到SMAY平板上，在25±1℃和12L:12D光照条件下培养7d，长满孢子的平板贮藏于-20℃冰箱备用，所有孢子粉的活孢率不低于95％。

6.根据权利要求4所述的一种促生水稻与降镉的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，所述发酵培养基中包括葡萄糖15-25g/L，牛肉膏3.0-5.0g/L和氯化钙1.0-6.0g/L，调节培养基pH值至6.0-7.0。