[发明专利]一种检测人类致病菌的引物和探针组合、试剂盒

权利要求书

1.一种检测人类致病菌的引物和探针组合，其特征在于，包括：

用于检测铜绿假单胞菌的SEQ ID NO:1～2所示核苷酸序列的引物和SEQ ID NO:3所示核苷酸序列的探针；

用于检测大肠埃希菌的SEQ ID NO:4～5所示核苷酸序列的引物，SEQ ID NO:6所示核苷酸序列的探针；

用于检测肺炎克雷伯菌的SEQ ID NO:7～8所示核苷酸序列的引物和SEQ ID NO:9所示核苷酸序列的探针；

用于检测表皮葡萄球菌的SEQ ID NO:10～11所示核苷酸序列的引物和SEQ ID NO:12所示核苷酸序列的探针；

用于检测金黄色葡萄球菌的SEQ ID NO:1、13所示核苷酸序列的引物和SEQ ID NO:14所示核苷酸序列的探针；

用于检测屎肠球菌的SEQ ID NO:1、13所示核苷酸序列的引物和SEQ ID NO:15所示核苷酸序列的探针；

用于检测人葡萄球菌的SEQ ID NO:1、13所示核苷酸序列的引物和SEQ ID NO:16所示核苷酸序列的探针；和\或

用于检测鲍曼不动杆菌的SEQ ID NO:1～2所示核苷酸序列的引物和SEQ ID NO:17所示核苷酸序列的探针。

2.根据权利要求1所述的探针和引物组合，其特征在于，所述探针的5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团。

3.根据权利要求2所述的探针组和引物组，其特征在于，所述荧光报告基团包括FAM、VIC、ROX、CY5、CY5.5、ATTO 425、Dylight 755、Alexa Fluor680(ATTO680)，所述荧光淬灭基团包括TAMRA、DABCYL、MGB、BHQ0、BHQ1、BHQ2和BHQ3。

4.根据权利要求2所述的引物和探针组，其特征在于，

SEQ ID NO:3所示核苷酸序列的探针的5’端标记有荧光报告基团FAM，3’端标记有荧光淬灭基团MGB；

SEQ ID NO:6所示核苷酸序列的探针的5’端标记有荧光报告基团VIC，3’端标记有荧光淬灭基团MGB；

SEQ ID NO:9所示核苷酸序列的探针的5’端标记有荧光报告基团ROX，3’端标记有荧光淬灭基团MGB；

SEQ ID NO:12所示核苷酸序列的探针的5’端标记有荧光报告基团CY5，3’端标记有荧光淬灭基团MGB；

SEQ ID NO:14所示核苷酸序列的探针的5’端标记有荧光报告基团FAM，3’端标记有荧光淬灭基团MGB；

SEQ ID NO:15所示核苷酸序列的探针的5’端标记有荧光报告基团VIC，3’端标记有荧光淬灭基团MGB；

SEQ ID NO:16所示核苷酸序列的探针的5’端标记有荧光报告基团ROX，3’端标记有荧光淬灭基团MGB；

SEQ ID NO:17所示核苷酸序列的探针的5’端标记有荧光报告基团CY5，3’端标记有荧光淬灭基团MGB。

5.权利要求1～4任一项所述的引物和探针组合在制备检测血液、胸水、腹水、脑脊液、尿液和痰液中常见人类致病菌的试剂中的应用。

6.一种用于检测临床样本中人类致病菌的试剂盒，包括权利要求1～4任一项所述的引物和探针组合。

7.根据权利要求6所述的制剂盒，其特征在于，所述临床样本为血液、胸水、腹水、脑脊液、尿液或痰液。

8.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，还包括多重数字PCR检测试剂；所述多重数字PCR检测试剂包括PCR Mix反应液和超纯水。

9.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，还包括样本提取试剂；所述样本提取试剂包括裂解液、Proteinase K、磁珠悬液、洗涤液、异丙醇、75％乙醇和洗脱液。

10.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，还包括阴性对照品和阳性对照品；

所述阴性对照品为水；

所述阳性对照品为含有铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、屎肠球菌、人葡萄球菌或鲍曼不动杆菌的靶基因片段的质粒溶液。